[發(fā)明專利]一種熒光微球標(biāo)記的免疫層析法新型冠狀病毒檢測試紙條及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請日: 2021-07-27
• 公開（公告）號: CN113567666A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔大祥;沈琦;梁輝;田靜;彭家偉;張文樺;高昂;周誠
• 申請（專利權(quán)）人: 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/58;G01N21/64
• 代理公司: 上海東亞專利商標(biāo)代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

本發(fā)明涉及一種熒光微球標(biāo)記的免疫層析法制備的新型冠狀病毒檢測試紙條及其制備方法和應(yīng)用，所述的檢測試紙條含有使用熒光微球標(biāo)記的免疫層析法檢測新型冠狀病毒的試劑；所述的檢測新型冠狀病毒的試劑包括：免疫熒光微球，所述的免疫熒光微球是偶聯(lián)抗原的熒光微球，所述的抗原是新型冠狀病毒的一種蛋白；識別抗新型冠狀病毒抗原的物質(zhì)。本發(fā)明還提供了熒光微球標(biāo)記的免疫層析法檢測新冠病毒抗體的方法及相關(guān)的試劑、試紙條。結(jié)果顯示，本發(fā)明的試紙條的檢測準(zhǔn)確率90%以上，5?10分鐘內(nèi)就可以判斷結(jié)果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種熒光微球標(biāo)記的免疫層析法制備的新型冠狀病毒檢測試紙條及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著新型冠狀病毒?。–OVID-19) 的暴發(fā)和在全球的迅速蔓延，病毒（SARS-CoV-2）核酸反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)綌U增（RT-PCR）檢測已成為診斷SARS-CoV-2感染的標(biāo)準(zhǔn)方法，但這些實時PCR檢測試紙條有很多局限性，假陰性率過高，迫切需要一種準(zhǔn)確、快速的檢測方法，快速發(fā)現(xiàn)大量感染患者和無癥狀攜帶者，防止病毒傳播，確?；颊叩玫郊皶r治療。目前從分子層面上診斷SARS-COV-2包括有核酸的檢測方法和抗原/抗體的免疫檢測方法，基于核酸的檢測方法包括病毒核酸特異基因檢測和病毒基因組測序。目前已批準(zhǔn)在臨床上使用的核酸檢測試紙條，存在操作繁瑣、耗時長、需要集中送檢和專業(yè)設(shè)備和人員等限制，有很高的技術(shù)門檻，大大的限制了核酸檢測方法的使用和便捷性，同時目前臨床上發(fā)現(xiàn)假陰性率偏高。熒光微球是一種處于納米級（100-300 nm）的熒光發(fā)光材料，其所具有的表面效應(yīng)、量子效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)和宏觀量子隧道效應(yīng)等特性賦予了他們獨特的光學(xué)、熱學(xué)、力學(xué)及化學(xué)活性。熒光微球可用于產(chǎn)生不同類型的檢測信號、放大檢測信號的強度及簡化檢測過程等，因此基于納米材料的體外診斷技術(shù)具有廣闊的應(yīng)用前景。目前熒光微球由于其良好的生物相容性、生物可降解性等，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于：提供一種熒光微球標(biāo)記的免疫層析法制備的新型冠狀病毒檢測試紙條，以便準(zhǔn)確、快速的檢測、發(fā)現(xiàn)新冠病毒的抗體。

本發(fā)明的再一目的在于：提供一種熒光微球標(biāo)記的免疫層析法制備的新型冠狀病毒檢測試紙條的制備方法。

本發(fā)明的又一目的在于：提供一種熒光微球標(biāo)記的免疫層析法制備的新型冠狀病毒檢測試紙條在檢測檢測新冠病毒抗體中的應(yīng)用。

本發(fā)明目的通過下述方案實現(xiàn)：一種熒光微球標(biāo)記的免疫層析法制備的新型冠狀病毒檢測試紙條，其特征在于，使用含有熒光微球標(biāo)記的免疫層析法檢測新型冠狀病毒。

免疫熒光微球，使用蛋白標(biāo)記熒光微球，所述的免疫熒光微球中，抗體與熒光微球的質(zhì)量比例為（1-10）：40。所述的試紙包括上樣墊、結(jié)合墊、吸收墊、反應(yīng)膜；所述的上樣墊，作為待測樣品加入的部位，與結(jié)合墊以及反應(yīng)膜連通；所述的結(jié)合墊，與免疫熒光微球結(jié)合；所述的反應(yīng)膜，連接新冠病毒抗原，所述的新冠病毒抗原識別新冠病毒抗體；所述的吸收墊，吸收未與結(jié)合墊或者反應(yīng)膜結(jié)合而留存的液體所含物質(zhì)。本發(fā)明提供一種熒光微球標(biāo)記的免疫層析法制備的新型冠狀病毒檢測試紙條的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）熒光微球偶聯(lián)物的制備：

a. 活化：量取偶聯(lián)液180 μL于1.5 mL離心管，加入熒光微球200 – 400 μg，加入0.05 mL偶聯(lián)液溶解的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC ) 100 μg和0.05mL偶聯(lián)液溶解的N-羥基琥珀酰亞胺（NHS） 100 μg，于37℃反應(yīng)0.5h，10000 rpm離心后用0.05 mL pH 8.0 磷酸鹽緩沖鹽溶液（PBS緩沖液）重懸；

b. 偶聯(lián)：向熒光微球加入偶聯(lián)液稀釋的新型冠狀病毒RBD蛋白 10 μg，新型冠狀病毒蛋白二抗（CR2 ）10 μg于37℃反應(yīng)0.5h后至于4℃冰箱過夜；

c. 封閉：將熒光微球從4℃冰箱取出，加入封閉液0.3 mL，加入5% 吐溫20（Tween-20） 0.1 mL，于37℃反應(yīng)0.5h；