[發明專利]一種酶法水解富集魚油中EPA、DHA的方法

在審

• 申請號: 202110848481.1
• 申請日: 2021-07-27
• 公開（公告）號: CN113584092A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 王永華;劉壯;藍東明;楊博;劉萱;羅日明;李志剛;王衛飛
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C07C67/54;C07C67/58;C07C69/587
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛鵬

本發明屬富集油脂中特定脂肪酸的技術領域，公開了一種酶法水解富集魚油中EPA、DHA的方法，包括如下步驟：(1)將魚油、水和脂肪酶混合，20?70℃進行水解反應，水解產物酸價為60±15mg/g時停止反應；(2)離心步驟(1)水解產物，取上層油相，與水和偏甘油酯脂肪酶混合繼續水解反應，水解產物酸價為70±15mg/g時，停止反應；(3)離心步驟(2)水解產物，取上層油相，分子蒸餾后所得重相為富含EPA、DHA的混合甘油酯。水解法直接使用魚油和水作為原料，環境友好、綠色安全、操作簡單，不消耗試劑，成本降低，兩步水解后DHA、EPA在魚油中占比可達45.53％?60.45％。

技術領域

本發明屬于富集油脂中特定脂肪酸的技術領域，具體涉及一種酶法水解富集魚油中EPA、DHA的方法。

背景技術

二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)均屬于ω-3多不飽和脂肪酸系列，后者還是大腦和視網膜組織的細胞膜的主要成分。

但EPA和DHA作為人體不能自身合成的必需脂肪酸，必須通過食物來攝取。目前人體EPA和DHA的補充主要來源于市售魚油，但天然魚油甘油酯中EPA和DHA含量普遍偏低(＜25％)，在醫藥和保健品領域不能滿足人體的要求。因此通過市售天然魚油富集EPA和DHA來滿足人體需要具有極大的市場前景。DHA和EPA產品的富集形式主要有游離型、乙酯型、甘油酯型，其中游離型EPA和DHA因口味酸難以被人接受，且極易氧化腐敗變質形成對人體有害的物質；乙酯型EPA和DHA食用難以被人體吸收消化，同時存在安全隱患；因而只有甘油酯型EPA和DHA能滿足人體吸收消化需求，包括甘油二酯型EPA、DHA和甘油三酯型EPA、DHA。甘油二酯是甘油三酯(TAG)的一個脂肪酸被羥基取代的所形成的結構脂，由兩個結構異構體1,2-DAG和1,3-DAG組成，是食用油天然組成的一部分。甘油二酯被美國食品藥品監督局(FDA)列為安全食品(GRAS)，在食品領域具有廣泛的應用。

目前富集EPA和DHA的方法分為傳統方法和酶法富集。傳統方法包括：低溫結晶法、尿素包合法、分子蒸餾法、銀離子絡合法、超臨界流體萃取法。傳統方法在富集EPA和DHA中存在成本高、工藝復雜、產生大量固廢、反應時間長、反應產率低等缺點，同時富集過程中還存在EPA和DHA的氧化損失。工業上富集EPA和DHA多采用酶法富集，其中主要是酶法合成甘油三酯型EPA、DHA進行富集。利用酶法催化富集EPA和DHA合成甘油三酯主要包括酯化、酯交換、水解三種催化形式，但由于EPA和DHA具有長碳鏈以及順勢雙鍵，造成了EPA和DHA空間結構大，因而進行酯化和酯交換時，產率低且反應時間長，同時酶法合成甘油三酯型EPA和DHA前期需要用一些傳統方法來富集游離EPA和DHA，存在傳統方法固有的缺點。

李俊在其碩士論文《米曲霉脂肪酶制備高含量多不飽和脂肪酸魚油的研究》中，以國產鳀魚魚油為原料，采用酶法醇解和酯酯交換反應兩步法富集制備高含量EPA和DHA甘油酯產品，優化反應條件，反應48h后，產物甘油酯中EPA和DHA總含量可達到41.78％。李麗帆等人在《生物加工過程》2009年7卷6期發表了《固定化脂肪酶選擇性水解廢棄魚油富集DHA和EPA甘油酯》，該文采用兩次水解，第一次水解11.7h后進行第二次水解，經過兩次水解，EPA和DHA質量分數分別從原始魚油的4.2％和18.9％提高到8.5％和42％。劉芳在其碩士論文《酶法催化制備富含EPA和DHA甘油三酯研究》中，以精煉深海魚油為原料，首先以脂肪酶Amano AY“Amano”400SD為催化劑對原料進行水解，然后用水解反應得到的甘油酯與濃縮魚油乙酯在真空條件下通過酶催化酯交換反應合成甘油三酯，產品甘油酯中EPA和DHA的含量分別為25.3wt％、21.6wt％。上述這些方法均對EPA和DHA進行了一定量的富集，然而與本發明的兩步水解法相比，上述方法存在反應時間長、能耗高、富集率低等缺點，同時上述方法富集得到的產品中含有一定量的單甘酯和游離脂肪酸，影響產品質量，不能作為工業富集EPA和DHA的方法。

發明內容