[發明專利]一種快速檢測混合菌藥敏信息的方法

在審

• 申請號: 202110843919.7
• 申請日: 2021-07-26
• 公開（公告）號: CN113584119A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 曹潔茹;蔡克亞;趙高嶺;劉美麗;孫苛苛;韓珍珍
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;G01N27/62
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發明涉及藥敏檢測技術領域，特別涉及一種快速檢測混合菌藥敏信息的方法。該方法包括：①菌體富集：將血液陽性樣本與表面活性劑溶液混合，離心后棄去上清，得到沉淀的菌體；②藥敏檢測：配制菌懸液；將同一革蘭氏染色類型的兩種不同菌的菌懸液混合，將所得混合菌懸液加至藥敏芯片靶板上，孵育，吸棄上部液體，對藥敏芯片靶板上點樣位置上的物質進行質譜檢測；根據質譜檢測結果進行藥敏結果判讀，分別得到兩種不同菌的MIC值，確定敏感、中介、耐藥信息。本發明打破了臨床混合菌需要再次轉接純化后再使用單菌落進行藥敏檢測的傳統模式，可同時在一個藥敏芯片上完成多個待測菌的藥敏檢測，為臨床檢測節約了再次培養純化的時間，節約了物料。

技術領域

本發明涉及藥敏檢測技術領域，特別涉及一種快速檢測混合菌藥敏信息的方法。

背景技術

近年來，微生物耐藥形式形勢日趨嚴峻，多重耐藥菌出現的概率逐漸升高，在臨床上，而抗生素的濫用是導致這一現象的重要原因之一，臨床分離的致病菌的精準用藥正逐漸代替經驗用藥，因此，藥敏MIC值檢測越來越重要。

目前傳統的藥敏檢測方法主要步驟如下：(1)臨床采集的標本如血液標本、尿液標本、痰標本等進行平板或血培養瓶培養，同時進行革蘭染色鏡檢，根據染色反應及菌株形態特征，將染色結果作危急值報告；(2)獲得的菌進行初步診斷，再次分離純化；(3)使用純的單菌落進行藥敏試驗檢測，獲得致病菌的耐藥信息，向臨床發最終報告。

MALDI-TOF MS作為一種新興的軟電離質譜技術，主要是通過采集未知微生物的蛋白質指紋圖譜并與已知數據庫中的蛋白圖譜進行比對，從而確定其分類學種屬地位。目前常用的微生物檢測方法為形態學特征、生理生化反應、血清學反應和測序，形態學和生化是目前臨床上最常用的方法，形態學法是根據微生物在固/液體培養基上的生長狀態及染色反應、顯微鏡下觀察結果來初步進行物種鑒定，該方法成本較低、檢測速度相對較快，但對操作者的專業要求較高，很容易出現誤判，且鑒定種類有限。生理生化反應法流程比較繁瑣，需要先判斷是革蘭氏陽性菌還是陰性菌，然后再根據形態、酶反應、顯色等不同方法，將具體微生物種類鑒定出來。血清學反應是利用已知菌種的抗血清，觀察與待鑒定菌是否發生特異性的血清學反應來鑒定其種類，該技術檢測速度較快，但技術受限程度較大，能檢測的物種較少。測序技術是從遺傳進化角度闡明微生物種群之間的分類學關系，不依賴菌種本身特點，對所有菌種均可使用，鑒定準確率高，是目前微生物鑒定技術的金標準。但由于測序技術檢測成本高，耗時長，現階段難以在臨床大規模推廣，臨床仍以傳統微生物檢測方法(形態/生化)為主。隨著感染微生物的復雜程度不同，傳統微生物檢測時間長到幾天，短到幾小時都有可能，且能鑒定出來的種類有限，準確度一般。相比傳統方法而言，MALDI-TOFMS質譜儀具有鑒定速度快、準確和低成本等絕對優勢，已經成為臨床微生物檢驗領域最富有生命力的新技術之一。

目前國內外學者也有嘗試將質譜技術應用于臨床樣本的直接檢測，并取得了顯著的進展，針對不同標本各專家有不一樣的前處理技術，離心、過濾、表面活性劑等，且通過質譜對臨床樣本進行直接檢測這一技術正逐步獲得臨床和微生物實驗室的認可，這大大縮短了臨床報告的時間。

但是，在醫學領域不僅需要快速鑒定，還需要檢測出對常用抗生素的耐藥性。由于近年來抗生素的濫用，導致耐藥菌的大量增加，臨床在不知道其耐藥性的情況下將無法有效控制并治療疾病，因此，不僅有必要對血液或其他體液感染性微生物進行快速鑒定，還有必要快速確定其對不同抗生素的耐藥性，這對臨床的抗感染治療具有非常重要的意義。