[發明專利]一種快速檢測血液中感染性微生物藥敏的方法

在審

• 申請號: 202110843165.5
• 申請日: 2021-07-26
• 公開（公告）號: CN113584118A
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 曹潔茹;蔡克亞;趙高嶺;劉美麗;李越峰;封松利;蔡艷婷
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;G01N27/62
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

1.一種快速檢測血液中感染性微生物藥敏的方法，其特征在于，包括以下步驟：

菌體富集：將血液陽性樣本與表面活性劑溶液混合，離心后棄去上清；所得沉淀與清洗液混合并離心，棄去上清，得到沉淀的菌體；

藥敏檢測：配制菌懸液；將菌懸液加至藥敏芯片靶板上，使藥敏芯片靶板上每個點樣位置上菌體的數量低于質譜檢測閾值，然后進行孵育，孵育完成之后吸棄上部液體，對藥敏芯片靶板上點樣位置上的物質的進行質譜檢測；根據質譜檢測結果進行藥敏結果判讀，藥敏芯片靶板上質譜檢測出微生物的位置認為有微生物生長，而無法檢測出微生物的點認為微生物生長被抑制，依據該信息得到MIC值，再依據CLSI、專家共識、EUCAST指南確定敏感、中介、耐藥信息。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，

所述藥敏芯片靶板包括陽性藥敏芯片靶板和陰性藥敏芯片靶板，所述陽性藥敏芯片靶板上包被有陽性菌適用的抗生素藥物，所述陰性藥敏芯片靶板上包被有陰性菌適用的抗生素藥物；

所述藥敏檢測步驟之前還包括血液革蘭氏染色步驟，根據所述革蘭氏染色步驟確定菌為陽性菌或陰性菌；

所述藥敏檢測步驟包括：根據菌種不同選用不同的藥敏芯片靶板：

當菌為陽性菌時，選擇陽性菌藥敏芯片靶板進行藥敏檢測；

當菌為陰性菌時，選擇陰性菌藥敏芯片靶板進行藥敏檢測。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述陽性藥敏芯片靶板包括96孔平面靶板和包被在平面靶板上的抗生素，在96孔平面靶板上的96個孔位內分別添加的抗生素和主要濃度為：

孔位1-4：阿米卡星(AN)：4，16，32，64

孔位5-9：慶大霉素(GM)：1，2，4，8，16

孔位10-16：左氧氟沙星(LEV)：0.125，0.25，0.5，1，2，4，8

孔位17-19：氨曲南(ATM)：4，8，16

孔位20-25：亞胺培南(IPM)：0.5，1，2，4，8，16

孔位26-31：美羅培南(MEM)：0.25，0.5，1，2，4，8

孔位32-37：替加環素(TGC)：0.5，1，2，4，8，16

孔位38-41：頭孢呋辛(CXM)：1，4，8，16

孔位42-47：頭孢他啶(CAZ)：1，2，4，8，16，32

孔位48-54：頭孢曲松(CRO)：1，2，4，8，16，32，64

孔位55-60：頭孢吡肟(FEP)：1，2，4，8，16，32，

孔位61-64：頭孢西丁(FOX)：8，16，32，64

孔位65-69：多粘菌素B(PB)：0.5，1，2，4，8

孔位70-73：米諾環素(MI)：2，4，8，16

孔位74-76：氨芐西林/舒巴坦(SAM)：8/4，16/8，32/16

孔位77-81：復方新諾明(SXT)：1/19，2/38，4/76，8/152，16/304

孔位82-85：頭孢他啶/阿維巴坦(CZA)：0.5/4，8/4，16/4，32/4

孔位86-91：哌拉西林/他唑巴坦(TZP)：4/4，8/4，16/4，32/4，64/4，128/4

孔95：陰性對照

孔96：陽性對照。