[發明專利]表達禽傳染性支氣管炎病毒S蛋白重組新城疫載體疫苗、制備方法及應用有效
| 申請號： | 202110832593.8 | 申請日： | 2021-07-22 |
| 公開（公告）號： | CN113462660B | 公開（公告）日： | 2023-03-24 |
| 發明（設計）人： | 潘茲書;許路來;溫國元 | 申請（專利權）人： | 武漢大學 |
| 主分類號： | C12N7/01 | 分類號： | C12N7/01;C12N15/50;A61K39/295;A61K39/17;A61K39/215;A61P31/14;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401 | 代理人： | 張曉博 |
| 地址： | 430072 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 表達 傳染性 支氣管炎 病毒 蛋白 重組 新城 載體 疫苗 制備 方法 應用 | ||
1.表達禽傳染性支氣管炎病毒S蛋白重組新城疫載體疫苗在制備誘導機體產生針對新城疫病毒和/或傳染性支氣管炎病毒的特異性免疫應答功能的試劑中的應用，其特征在于：以新城疫熱穩定疫苗rTS09-C株為材料，通過反向遺傳操作將傳染性支氣管炎病毒S蛋白插入rTS09-C基因組的P和M基因之間，拯救獲得重組新城疫載體疫苗；
所述傳染性支氣管炎病毒S蛋白為SEQ ID NO.4所示的tS1/Nd蛋白；
利用引物對載體質粒pTS09-C進行擴增，得到線性化后的目的載體片段；
利用引物序列分別擴增SEQ ID NO.1-3和SEQ ID NO.5所示的序列得到tS1和Nd片段；將tS1片段和Nd片段通過重疊延伸的方式連接，組成tS1/Nd片段；
分別連接目的片段和載體，得到質粒pTS-tS1/Nd；
經過病毒拯救，分別得到重組新城疫載體疫苗rTS-tS1/Nd；
利用如SEQ ID NO.14和SEQ ID NO.15所示的引物序列對載體質粒pTS09-C進行擴增；
利用如SEQ ID NO.12-SEQ ID NO.13所示的引物序列分別擴增得到tS1和Nd片段；
使用同源重組酶In-fusion酶連接目的片段和載體。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述特異性免疫應答包括誘導機體產生相應抗體。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述特異性免疫應答包括調控機體IFN-γ的含量。
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