[發(fā)明專利]一種小鼠胚胎成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化株及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110832354.2
• 申請日: 2021-07-22
• 公開（公告）號: CN113999812A
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張芳芳;朱麗瑾;苑修源;張敏;肖蕓;鞠莉;余珉;應(yīng)士波;高雅楠
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州醫(yī)學(xué)院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224
• 代理人: 韓聰

1.一種小鼠胚胎成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化株，其特征在于，分類命名為：小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系NIH3T3/3As-T，保藏號為：CCTCC NO：C2021138。

2.一種如權(quán)利要求1所述的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化株的子代細(xì)胞。

3.如權(quán)利要求1所述的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化株在作為石棉致癌機(jī)制研究的細(xì)胞模型中的應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述石棉為溫石棉。

5.如權(quán)利要求1所述的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化株在提取纖維瘤特異性腫瘤標(biāo)志物中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求1所述的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化株在篩選或評估治療纖維瘤藥物中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述纖維瘤為溫石棉導(dǎo)致的纖維肉瘤。

8.一種3D培養(yǎng)條件下溫石棉誘導(dǎo)小鼠胚胎成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將對數(shù)生長期的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞NIH/3T3消化后用完全培養(yǎng)基重懸，得到密度為1～2×10⁶個(gè)細(xì)胞/mL的單細(xì)胞懸液，再在冰浴下，將單細(xì)胞懸液和Matrigel基質(zhì)膠等體積混合，鋪入細(xì)胞培養(yǎng)板中，37℃孵育30～45分鐘后，加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)20～24h；

(2)棄去培養(yǎng)基，加入1.0～1.5μg/mL的溫石棉溶液處理48h后，換成完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天；

(3)再重復(fù)步驟(2)兩次；

(4)收集細(xì)胞，篩選獲得發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化株。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述單細(xì)胞懸液的密度為1×10⁶個(gè)細(xì)胞/mL，溫石棉溶液處理的濃度為1.25μg/mL。

10.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述溫石棉溶液的稀釋劑為磷酸緩沖液。