[發明專利]SD大鼠血漿中北五加皮苷M含量的測定方法

有效

• 申請號: 202110829016.3
• 申請日: 2021-07-22
• 公開（公告）號: CN113588818B
• 公開（公告）日: 2023-08-29
• 發明（設計）人: 李明;盤建紅
• 申請（專利權）人: 安領生物醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 蘇州隆恒知識產權代理事務所(普通合伙) 32366
• 代理人: 周子軼

本發明公開了一種SD大鼠血漿中北五加皮苷M含量的測定方法，包括以下步驟：配制北五加皮苷M梯度濃度為10.0～10000ng/mL的校正標示工作液。采用空白基質將各濃度的校正標示工作液稀釋20倍，得到校正標示樣品，所述空白基質為不含北五加皮苷M的SD大鼠血漿。采用10.0ng/mL甲苯磺丁脲內標工作液將各濃度的校正標示樣品稀釋20倍，離心取上清液，用超純水稀釋2倍，采用LC?MS/MS進樣分析，得到北五加皮苷M的線性回歸方程。采用10.0ng/mL甲苯磺丁脲內標工作液將待測SD大鼠血漿稀釋20倍，離心取上清液，用超純水稀釋2倍，采用LC?MS/MS進樣分析，根據北五加皮苷M的線性回歸方程得到北五加皮苷M的含量。本發明測定方法對樣品分析簡單便捷，檢出限低、靈敏度高、重復性和回收率好。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體的是一種SD大鼠血漿中北五加皮苷M含量的測定方法。

背景技術

北五加皮苷M在科研研究、鑒定、藥理實驗等過程中具有廣泛應用，對推動醫藥研發技術領域的發展具有重要意義。

研究SD大鼠血漿中北五加皮苷M的測定方法，對于研究北五加皮苷M在給藥后，在血漿里的代謝情況具有重要意義。

現有技術中，對于SD大鼠血漿中北五加皮苷M的測定方法，測試的準確性低，并且穩定性差，給研究帶來了極大的不便。

因此，有必要對現有技術中SD大鼠血漿中北五加皮苷M的測定方法做出改進。

發明內容

為了克服現有技術中的缺陷，本發明提供了一種SD大鼠血漿中北五加皮苷M含量的測定方法，其對樣品分析簡單便捷，檢出限低、靈敏度高、重復性和回收率好。

本發明公開了一種SD大鼠血漿中北五加皮苷M含量的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

以北五加皮苷M為溶質，以50wt％乙腈水溶液為溶劑，配制北五加皮苷M梯度濃度為10.0～10000ng/mL的校正標示工作液；

采用空白基質將各濃度的校正標示工作液稀釋20倍，得到校正標示樣品，所述空白基質為不含北五加皮苷M的SD大鼠血漿；

采用10.0ng/mL甲苯磺丁脲內標工作液將各濃度的校正標示樣品稀釋20倍，離心取上清液，將上清液用超純水稀釋2倍，采用LC-MS/MS進樣分析，得到北五加皮苷M的線性回歸方程；

采用10.0ng/mL甲苯磺丁脲內標工作液將待測SD大鼠血漿稀釋20倍，離心取上清液，將上清液用超純水稀釋2倍，采用LC-MS/MS進樣分析，根據北五加皮苷M的線性回歸方程得到SD大鼠血漿中北五加皮苷M的含量。

作為優選，所述LC-MS/MS分析中液相色譜條件包括：

固定相：填料粒徑為5μm，直徑2.1mm，長度50mm的ACE?5C18色譜柱；

流動相：流動相為A和B的混合體系；

A為甲酸乙酸銨水溶液，甲酸、乙酸銨水溶液和水的體積比為0.1:0.2:100，乙酸銨水溶液中乙酸銨的濃度為1mol/L；

B為甲酸乙酸銨甲醇乙腈溶液，甲酸、乙酸銨水溶液、甲醇和乙腈的體積比為0.1:0.1:50:50，乙酸銨水溶液中乙酸銨的濃度為1mol/L。

進一步優選，所述LC-MS/MS分析中液相色譜條件包括：流速：0.40mL/min；

柱溫：40℃；

自動進樣器溫度：4℃；

進樣量：10μL。

進一步優選，所述LC-MS/MS分析中梯度洗脫程序為：

0.01min，A的體積百分比為40％，B的體積百分比為60％；