[發(fā)明專利]用于毛花獼猴桃雌雄性別鑒定的SSR分子標(biāo)記AerM02及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110826986.8
• 申請(qǐng)日: 2021-07-21
• 公開（公告）號(hào): CN113637784B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 岳俊陽(yáng);任旺梅;劉永勝;唐維
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12Q1/6879;C12N15/11
• 代理公司: 合肥昊晟德專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34153
• 代理人: 王林

本發(fā)明涉及分子遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于毛花獼猴桃雌雄性別鑒定的SSR分子標(biāo)記AerM02及其應(yīng)用，SSR分子標(biāo)記AerM02引物的序列如SEQ.ID?No1和SEQ.ID?No2所示，擴(kuò)增得到的雄株特異片段核苷酸序列如SEQ.ID?No3所示；本發(fā)明直接利用已經(jīng)發(fā)表的基因組進(jìn)行差異序列的比較，省去了構(gòu)建獼猴桃雜交群體的工作，具有快速、簡(jiǎn)便、低成本的優(yōu)點(diǎn)，而且該方法可以擴(kuò)展到任何群體，具有普適性；這種SSR分子標(biāo)記AerM02主要針對(duì)毛花獼猴桃群體，SSR分子標(biāo)記AerM02具有特異性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子遺傳育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種用于毛花獼猴桃雌雄性別鑒定的SSR分子標(biāo)記AerM02(AerM02是為區(qū)別其它SSR分子標(biāo)記而命名，Aer為毛花獼猴桃拉丁名Actinidia?eriantha的三字母縮寫，M為分子標(biāo)記marker的首字母縮寫)及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

獼猴桃除含有獼猴桃堿、蛋白水解酶、單寧果膠和糖類等有機(jī)物，以及鈣、鉀、硒、鋅、鍺等微量元素和人體所需17種氨基酸外，還含有豐富的維生素C、葡萄酸、果糖、檸檬酸、蘋果酸、脂肪。獼猴桃為雌雄異株的大型落葉木質(zhì)藤本植物，獼猴桃雜交后代的雌雄分離比例約為1:1，鑒于獼猴桃雌雄異株的性別功能，獼猴桃果園通常配置少量授粉雄株以保證果園產(chǎn)量和果實(shí)品質(zhì)，對(duì)獼猴桃雌雄株的辨別需要在獼猴桃開花后，從獼猴桃花的形態(tài)結(jié)構(gòu)差異表別獼猴桃的雌雄株，給獼猴桃的育種和種植帶來(lái)了不便以及浪費(fèi)。

SSR(Simple?Sequence?Repeats)標(biāo)記是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種以特異引物PCR為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)，也稱為微衛(wèi)星DNA(MicrosatelliteDNA)，是一類由幾個(gè)核苷酸(一般為1～6個(gè))為重復(fù)單位組成的長(zhǎng)達(dá)幾十個(gè)核苷酸的串聯(lián)重復(fù)序列。每個(gè)SSR兩側(cè)的序列一般是相對(duì)保守的單拷貝序列，與其它分子標(biāo)記相比，SSR標(biāo)記具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)數(shù)量豐富，覆蓋整個(gè)基因組，揭示的多態(tài)性高；(2)具有多等位基因的特性，提供的信息量高；(3)以孟德爾方式遺傳，呈共顯性；(4)每個(gè)位點(diǎn)由設(shè)計(jì)的引物順序決定，便于不同的實(shí)驗(yàn)室相互交流合作開發(fā)引物。然而，現(xiàn)有的獼猴桃SSR分子標(biāo)記依賴雜交群體，周期長(zhǎng)，人力和資金投入大，所選潛在SSR標(biāo)記只能局限于所篩選的性別決定區(qū)間，數(shù)量有限，只適用于中華獼猴桃，并不能用于毛花獼猴桃。

鑒于上述缺陷，本發(fā)明創(chuàng)作者經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的研究和實(shí)踐終于獲得了本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決沒有適用于毛花獼猴桃群體的獼猴桃SSR分子標(biāo)記的問題，提供了一種用于毛花獼猴桃雌雄性別鑒定的SSR分子標(biāo)記AerM02及其應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開了一種用于毛花獼猴桃雌雄性別鑒定的SSR分子標(biāo)記AerM02，SSR分子標(biāo)記AerM02引物的序列如SEQ.ID?No1和SEQ.ID?No2所示，擴(kuò)增得到的雄株特異片段核苷酸序列如SEQ.ID?No3所示。

本發(fā)明還公開了上述用于毛花獼猴桃雌雄性別鑒定的SSR分子標(biāo)記AerM02的獲得方法，包括以下步驟：

S1：利用毛花獼猴桃雌雄株個(gè)體測(cè)序的基因組，進(jìn)行基因組水平的數(shù)據(jù)分析和比較，篩選其中在雌雄株個(gè)體中具有特異性的序列片段；

S2：使用篩選到的特異序列進(jìn)行SSR位點(diǎn)的鑒定，篩選得到潛在的SSR分子標(biāo)記；

S3：合成潛在SSR分子標(biāo)記的上下游引物，提取毛花獼猴桃的基因組DNA，進(jìn)行常規(guī)PCR和瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，篩選得到SSR分子標(biāo)記AerM02，該分子標(biāo)記的上下游引物能在雄株中擴(kuò)增出兩條清晰的條帶，而在雌株中擴(kuò)增出一條清晰的條帶，其中雄株中的一條擴(kuò)增條帶與雌株的擴(kuò)增條帶大小相同，另一條擴(kuò)增條帶具有特異性。

所述步驟S2中潛在的SSR分子標(biāo)記具有單個(gè)重復(fù)基序串聯(lián)排列的完美型的結(jié)構(gòu)類型，SSR分子標(biāo)記位點(diǎn)上下游具有非特異性的側(cè)翼序列，即在兩個(gè)基因組中具有同源性較高的序列，保證設(shè)計(jì)的上下游引物能同時(shí)在雌雄株個(gè)體中擴(kuò)增出條帶。