[發(fā)明專利]一種定量測定組培苗不同氮源的自養(yǎng)和異養(yǎng)效率的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110823014.3
• 申請日: 2021-07-21
• 公開（公告）號: CN113567624B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發(fā)明（設計）人: 吳沿友;張開艷;吳沿勝;方蕾;鄧智先;王世杰;劉叢強
• 申請（專利權）人: 中國科學院地球化學研究所
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 日照市聚信創(chuàng)騰知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 37319
• 代理人: 楊帆

1.一種定量測定組培苗不同氮源的自養(yǎng)和異養(yǎng)效率的方法，其特征在于：包含以下步驟：

第一，將所有培養(yǎng)選定在同一培養(yǎng)室中培養(yǎng)，所使用的蔗糖選定為同一生產(chǎn)廠家、同一批次的穩(wěn)定碳同位素組成相同的甘蔗蔗糖；

第二，將在甘蔗蔗糖培養(yǎng)基上培養(yǎng)的待測組培苗通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的激素比例使其處于增殖階段，形成無根的組培苗；同時測定組培培養(yǎng)基中甘蔗蔗糖的δ¹³C值δ_CS以及待測植物在該組培室中僅利用二氧化碳生長的葉片的δ¹³C值δ_C；

第三，通過測定用于配置植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中的硝酸鹽的穩(wěn)定氮同位素比值，篩選出穩(wěn)定氮同位素值差值大于10‰的兩種硝酸鹽，其穩(wěn)定氮同位素值分別為δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂；分別將這兩種硝酸鹽作為唯一氮源配置為待考察的硝酸鹽濃度的培養(yǎng)基；

第四，取帶有1個單芽的待測組培苗分別培養(yǎng)在上述穩(wěn)定氮同位素值不同的兩種硝酸鹽作為唯一氮源的培養(yǎng)基中；

第五，組培苗經(jīng)過5周培養(yǎng)后，分別測定上述兩種硝酸鹽作為唯一氮源的培養(yǎng)基培養(yǎng)下的組培苗葉片的穩(wěn)定氮同位素值，其葉片穩(wěn)定氮同位素值分別記為δ¹⁵N_N1和δ¹⁵N_N2；

第六，通過測定用于配置植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基中的銨鹽的穩(wěn)定氮同位素比值δ¹⁵N_A，選出其穩(wěn)定氮同位素比值δ¹⁵N_A與δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂均大于10‰的銨鹽；

第七，將穩(wěn)定氮同位素值為δ¹⁵N₀₁和δ¹⁵N₀₂的硝酸鹽分別與上述銨鹽配置成兩組混合氮源培養(yǎng)基；

第八，同樣，將帶有1個單芽的待測組培苗，分別同時培養(yǎng)在上述兩組混合氮源培養(yǎng)基上；

第九，同樣，待組培苗培養(yǎng)5周后，測定在上述兩組混合氮源培養(yǎng)基上培養(yǎng)的組培苗下葉片穩(wěn)定氮同位素值，銨鹽與穩(wěn)定氮同位素值為δ¹⁵N₀₁的硝酸鹽組成的混合氮源培養(yǎng)基培養(yǎng)的組培苗葉片穩(wěn)定氮同位素值記為δ¹⁵N_N1mix，銨鹽與穩(wěn)定氮同位素值為δ¹⁵N₀₂的硝酸鹽組成的混合氮源培養(yǎng)基培養(yǎng)下的組培苗葉片穩(wěn)定氮同位素值記為δ¹⁵N_N2mix；

第十，同時測定在上述兩組混合氮源培養(yǎng)基上培養(yǎng)的組培苗葉片穩(wěn)定碳同位素值δ_CT以及碳氮含量，葉片C/N比值記為R；

第十一，利用δ¹⁵N_N1、δ¹⁵N_N2以及δ¹⁵N_N1mix和δ¹⁵N_N2mix，計算組培苗利用硝酸鹽份額f_N；進而計算出銨鹽利用份額f_A；

第十二，利用δ_CS、δ_CT以及δ_C；計算組培苗自養(yǎng)份額f_AT；進而計算出異養(yǎng)份額f_HT；計算組培苗自養(yǎng)份額f_AT的方法為：將δ_CS、δ_CT以及δ_C帶入方程：異養(yǎng)份額f_HT的公式是：f_HT＝1-f_AT；

第十三，依據(jù)葉片的R、f_A、f_N、f_AT以及f_HT，進而獲得組培苗不同氮源的自養(yǎng)和異養(yǎng)效率；獲得組培苗不同氮源的自養(yǎng)和異養(yǎng)效率的方法為：銨態(tài)氮的自養(yǎng)效率E_AT-A，E_AT-A＝Rf_AT/f_A；銨態(tài)氮的異養(yǎng)效率E_HT-A，E_HT-A＝Rf_HT/f_A；硝態(tài)氮的自養(yǎng)效率E_AT-N，E_AT-N＝Rf_AT/f_N；硝態(tài)氮的異養(yǎng)效率E_HT-N，E_HT-N＝Rf_HT/f_N。