[發明專利]一種硒化青蛤多糖的制備方法

在審

• 申請號: 202110821943.0
• 申請日: 2021-07-20
• 公開（公告）號: CN113480671A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 朱繼強
• 申請（專利權）人: 廣州普德生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 河南大象律師事務所 41129
• 代理人: 楊曉虹

1.一種硒化青蛤多糖的制備方法，其特征在于，由以下步驟制備：S1，提取青蛤多糖；S2，制備磺酸甲基咪唑氯多孔磁性納米粒子；S3，合成硒化青蛤多糖；

所述步驟S3具體包括以下方法：(1)取青蛤多糖加入到DMSO中，75-85℃下攪拌3-4h，冷卻至室溫，得青蛤多糖懸浮溶液；(2)N₂氣保護下，取硒試劑加入到DMSO，然后加入磺酸甲基咪唑氯多孔磁性納米粒子，75-85℃下攪拌2-3h，得活化硒溶液；(3)N₂氣保護下，將青蛤多糖懸浮溶液滴加到活化硒溶液，75-85℃下持續攪拌反應4-5h，通過磁析法回收磺酸甲基咪唑氯多孔磁性納米粒子并用DMSO洗滌，然后過濾，DMSO洗滌濾餅，然后7000-8000r/min離心5-10min，取上清液，加入2-3倍的丙酮進行洗滌，重復上述方法洗滌，沉淀5-7次，直至丙酮層加入2％抗壞血酸未變紅后停止洗滌。加入蒸餾水至沉淀層，并攪拌致沉淀層完全溶解，倒置透析袋中流水透析40-48h，待透析完成后使用2％的抗壞血酸檢測未變紅(如顏色變紅需繼續透析)，然后將透析液再次7000-8000r/min離心5-10min，取其上清液60-80℃下濃縮，加入丙酮進行沉淀，冷凍干燥40-48h，得硒化青蛤多糖。

2.根據權利要求1所述的一種硒化青蛤多糖的制備方法，其特征在于所述的硒試劑結構為：

。

3.根據權利要求1所述的一種硒化青蛤多糖的制備方法，其特征在于，所述的青蛤粗多糖由以下方法制備：(1)將鮮活青蛤洗凈，去殼，取內臟組織置于78-82％乙醇浸沒，2-3天后取出，破碎勻漿，然后加入同濃度的乙醇浸泡，每隔5天倒出乙醇溶液，并加入等量75％乙醇，4周后棄去乙醇浸泡液，將青蛤勻漿液離心，保留沉淀物60-70℃烘干，得青蛤組織粉；(2)取青蛤組織粉，加入20倍的蒸餾水，100-110℃水浴提取，然后離心，過濾、濃縮，并加入無水乙醇至體積分數為75％，充分振蕩，4℃下靜置12h后，離心，保留沉淀物，于60-70℃下烘干，得青蛤多糖粗提物；(3)將青蛤多糖粗提物用10倍去離子水充分溶解，加入20％體積的Sevag試劑(氯仿:丁醇＝5:1)，振蕩25-35min后靜置10min，4000r/min離心10min，體系分成三層，保留中間層清液，重復3次，合并所得中間層清液，于40-50℃減壓濃縮，然后加無水乙醇至體積分數為90％，充分振蕩，4℃下靜置12h后，離心，保留沉淀物，于60-70℃下烘干，得青蛤多糖。

4.根據權利要求1所述的一種硒化青蛤多糖的制備方法，其特征在于，所述磺酸甲基咪唑氯多孔磁性納米粒子由以下方法制備：(1)將Fe₃O₄均勻分散到氯仿中，同時將十二烷基三甲基溴化銨超聲溶解于去離子水中，然后將Fe₃O₄的氯仿溶液滴加到十二烷基三甲基溴化銨的水溶液中形成油包水的反相微乳液，加熱到55-65℃，保持10-15min，使氯仿蒸發掉，然后加蒸餾水稀釋20倍，再依次加入氨水、TEOS、EtOAc，800-1000rpm攪拌反應3-4h，然后離心，依次用乙醇、酸性乙醇清洗沉降物，以除去有機物，最終得到多孔SiO₂包裹的Fe₃O₄的多孔磁性粒子；(2)將1-甲基咪唑和3-甲氧基氯芐混合，100-110℃下加熱攪拌5-6h，然后加入多孔磁性粒子，攪拌均勻，然后冰浴冷卻，緩慢加入冷的濃硫酸，室溫下攪拌4-5h，乙酸乙酯洗滌，真空干燥，得磺酸甲基咪唑氯多孔磁性納米粒子，為淺黃色粘性固體。

5.根據權利要求1所述的一種硒化青蛤多糖的制備方法，其特征在于，所述步驟S3具體方法(1)步驟中青蛤多糖:DMSO的質量體積比為：3-4g:300-400mL；所述步驟S3具體方法(2)步驟中硒試劑:DMSO:磺酸甲基咪唑氯多孔磁性納米粒子的質量體積比為：7-8g:350-400mL:8-10g；所述的滴加速度為15-20滴/min。

6.根據權利要求3所述的一種硒化青蛤多糖的制備方法，其特征在于，所述的離心速度為5000r/min，離心時間為20min。