[發明專利]一組豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原多肽及其應用

有效

• 申請號: 202110819705.6
• 申請日: 2021-07-20
• 公開（公告）號: CN113321712B
• 公開（公告）日: 2023-02-24
• 發明（設計）人: 安同慶;蔡雪輝;楊勇博;王海偉
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所（中國動物衛生與流行病學中心哈爾濱分中心）
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 李紅媛

一組豬繁殖與呼吸綜合征病毒的抗原多肽及其應用，它涉及生物檢測技術領域，本發明要解決在血清學上無法有效區分疫苗免疫和野毒感染的PRRS基因工程標記弱毒疫苗的問題，本發明的抗原肽是由序列表中SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2中的一種或者兩種所示的多肽組成的組合物。它用于制備ELISA診斷試劑盒。本發明篩選可用于鑒別診斷的蛋白多肽，并建立相應的間接ELISA檢測方法。為今后PRRS基因工程標記弱毒疫苗株提供候選標簽蛋白，為PRRS疫苗株和野毒株的鑒別診斷提供技術支持。本發明應用于豬用疫苗及診斷領域。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一組豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)病毒的抗原多肽及其多肽ELISA診斷試劑盒。

背景技術

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是豬的一種傳染性病毒病，給全世界養豬業造成了巨大經濟損失。因為發病豬耳部多發紺成藍紫色，也被稱為“藍耳病”(Keffaber et al.,1989)。臨床上主要表現為妊娠母豬的繁殖障礙以及各年齡階段豬的呼吸障礙。1987年美國首次出現PRRS，隨后該病在美國大范圍流行并傳播到加拿大等地區。隨后歐洲及亞洲一些國家和地區也相繼報道了該病(Albina et al.,1997)。1992年，世界動物衛生組織(OIE)將該病歸類為B類傳染病。我國于1996年郭寶清等首次在國內發現該病(郭寶清等,1996)，隨后幾年里該病在我國多個主要養豬省份均有報道。2006年，一種以發病急、傳播快、高發病率和高死亡率為特征的高致病性PRRS(highly pathogenic PRRS,HP-PRRS)在我國南方暴發(Tian et al.,2007)，并迅速蔓延到我國各省份，導致大量生豬死亡，直接經濟損失數十億元。隨后，高致病性PRRS成為我國的主流毒株，嚴重危害我國養豬業的健康發展。我國農業部將高致病性PRRS劃歸為一類傳染病，作為重點防控疾病。

疫苗接種是防控該病的有效辦法。截止到目前，市場上PRRSV疫苗的主要是弱毒疫苗和滅活疫苗，其中以弱毒疫苗為主。我國獲批準生產的PRRS弱毒疫苗有很多種，包括CH-1R株、JXA1-R株、HuN4-F112株、TJM株、GDr180株和R98株等。弱毒疫苗在預防PRRS方面起到了積極的作用，而現有的血清學鑒別診斷方法無法區分疫苗免疫和野毒感染，給PRRS疾病的檢測防控帶來了巨大困難。因此研制一種能夠在血清學上區分疫苗免疫和野毒感染的PRRS基因工程標記弱毒疫苗是當前情況下防控PRRS最佳選擇。

近年來，反向遺傳學技術的快速發展為標記疫苗的研究提供了重要的技術保障。在不影響病毒活性的前提下，通過刪除疫苗株中具有良好免疫原性的多肽作為缺失標記，再以該多肽為包被抗原，通過血清學檢測方法即可完成疫苗與野毒的鑒別診斷。因此，篩選出理想的抗原多肽，是PRRS基因工程標記弱毒疫苗研制的關鍵。

發明內容

本發明的目的是為了解決上述技術問題，而提供一組豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原多肽的篩選及其應用。

本發明的豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原多肽，所述的抗原多肽是由序列表中SEQID NO：1、SEQ ID NO：2中的一種或者兩種所示的多肽組成的組合物。

進一步地，所述的SEQ ID NO：1所示的多肽為豬繁殖與呼吸綜合征病毒NSP2蛋白第562-627位的氨基酸序列。

進一步地，所述的SEQ ID NO：2所示的多肽為豬繁殖與呼吸綜合征病毒NSP2蛋白第749-813位的氨基酸序列。

本發明的豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原多肽的應用，它用于制備ELISA診斷試劑盒。

進一步地，所述的ELISA診斷試劑盒包含豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗原多肽作為抗原包被的酶聯反應板、陽性對照血清、陰性對照血清、酶標二抗、樣品稀釋液、洗滌液、底物顯色液和終止液。