[發明專利]一種檢測志賀氏菌的CDA引物組、試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202110811897.6
• 申請日: 2021-07-19
• 公開（公告）號: CN113322338B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 毛瑞;吳欣瑤;蔡挺
• 申請（專利權）人: 國科寧波生命與健康產業研究院;中國科學院大學寧波華美醫院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/10;C12N15/11
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所(普通合伙) 31251
• 代理人: 郭桂峰

1.一種非疾病診斷目的的檢測志賀氏菌的CDA引物組，其特征在于：所述CDA引物組為以下兩對引物，

引物對Shi-F2/Shi-R2，其中，Shi-F2的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示， Shi-R2的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示；

引物對Shi-MF/Shi-MR，其中，Shi-MF的核苷酸序列如SEQ ID NO. 3所示，Shi-MR的核苷酸序列如SEQ ID NO. 4所示。

2.一種檢測志賀氏菌的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括權利要求1所述的CDA引物組。

3.如權利要求2所述的一種檢測志賀氏菌的試劑盒，其特征在于：所述CDA引物組中，引物Shi-F2與Shi-R2的濃度均為0.2～0.4 μM，引物Shi-MF與Shi-MR的濃度均為1～2 μM。

4.如權利要求2所述的一種檢測志賀氏菌的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括Bst聚合酶、CDA反應緩沖液、超純水、以及顯色劑。

5.如權利要求4所述的一種檢測志賀氏菌的試劑盒，其特征在于：所述顯色劑選自Sybrgreen I、Eva green、羥基萘酚藍、鉻黑T中的一種。

6.如權利要求4所述的一種檢測志賀氏菌的試劑盒，其特征在于：所述CDA反應緩沖液包括Tris-HCl、KCl、(NH₄)₂SO₄、MgSO₄和Triton X-100。

7.如權利要求2所述的一種檢測志賀氏菌的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒反應體系的組成為，

2-50 mM Tris-HCl pH8.8

2-20 mM KCl

2-20 mM (NH₄)₂SO₄

2～20 mM MgSO₄

0.1～0.5 % Triton X-100

0.2～1 M 甜菜堿

1～1.6 mM dNTP

5～10 U Bst DNA 聚合酶

100～150μmol/ L 顯色劑

0.2～0.4μM 引物Shi-F2

0.2～0.4μM 引物Shi-R2

1～2 μM 引物Shi-MF

1～2 μM 引物Shi-MR；

反應溶劑為超純水。

8.權利要求7所述的試劑盒非疾病診斷目的的檢測志賀氏菌的方法，包括以下步驟：

步驟1，將待檢測核酸樣本和試劑盒的反應體系混合，制得擴增反應液；

步驟2，上述制得的擴增反應液，于60～65℃反應20～80 min，根據顯色結果判斷樣品是否含有志賀氏菌。

9.權利要求1所述的CDA引物組在非疾病診斷目的的志賀氏菌檢測中的應用。

10.權利要求2-7任一項所述的試劑盒在非疾病診斷目的的志賀氏菌檢測中的應用。