[發(fā)明專利]實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的引物、探針及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110811251.8
• 申請(qǐng)日: 2021-07-19
• 公開（公告）號(hào): CN113355436A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王培培;董麗紅;郭慶港;馬平;李社增;蘇振賀
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河北省農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 北京細(xì)軟智谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11471
• 代理人: 鮑亞平

1.用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的引物和探針，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如下：

SEQ ID NO.1：5'-CTACCCTTATCGGTGGATCACTA-3'，

SEQ ID NO.2：5'-AATGACCCTGAACCAGACGTT-3'；

所述探針的核苷酸序列如下：

SEQ ID NO.3：5'-AGTTTGACCTCAATGCGGCCATTTGCGT-3'。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的引物和探針，其特征在于，所述探針的5’端標(biāo)記熒光基團(tuán)，所述探針的3’端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的引物和探針，其特征在于，所述探針的5’端標(biāo)記熒光素FAM基團(tuán)，所述探針的3’端標(biāo)記TAMAR淬滅基團(tuán)。

4.權(quán)利要求1所述的用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的引物和探針的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求1所述的用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的引物和探針在檢測(cè)南方根結(jié)線蟲方面的應(yīng)用。

6.檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含權(quán)利要求1所述的用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的引物和探針。

7.權(quán)利要求6所述的檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的試劑盒的應(yīng)用。

8.實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的方法，其特征在于，所述方法包括利用權(quán)利要求1所述的用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的引物和探針對(duì)南方根結(jié)線蟲的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增的步驟。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)體系包括以下組分：rTaq 0.5μL、MgCl₂ 3μL、10x PCR Buffer 2.5μL、dNTPs 2μL、探針1μL、引物2μL、0.1％BSA 5μL、H₂O 4μL、模板5μL。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)南方根結(jié)線蟲的方法，其特征在于，所述PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃30s；94℃5s；60℃30s，45個(gè)循環(huán)。