[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)食管癌標(biāo)志物P16抗原表位氨基酸序列及應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110810643.2
• 申請(qǐng)日: 2021-07-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113549142A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉林林;皇甫明美
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/47
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/47;G01N33/574
• 代理公司: 吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 22100
• 代理人: 許寶貴

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)食管癌標(biāo)志物P16抗原表位氨基酸序列及應(yīng)用，屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種腫瘤抑癌基因P16的抗原氨基酸序列，應(yīng)用P16多肽抗原檢測(cè)食管癌患者血中相應(yīng)的特異性抗原表位，這種抗原表位可作為腫瘤標(biāo)志物評(píng)估食管癌發(fā)生的危險(xiǎn)度，這種抗原多肽及其抗體可用于制備食管癌早期診斷試劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，是一種用于制備食管癌早期診斷試劑。

背景技術(shù)

大量研究表明，血清或血漿中的腫瘤相關(guān)抗原能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗原表位,在腫瘤患者血清中既存在腫瘤抗原,也存在針對(duì)該腫瘤抗原的抗原表位。因此，既可以利用抗體檢測(cè)腫瘤抗原,也可以利用抗原檢測(cè)腫瘤抗原表位，但利用腫瘤抗原表位檢測(cè)腫瘤的特異性和敏感性均比利用腫瘤抗原檢測(cè)腫瘤要高得多。很多腫瘤相關(guān)抗原不僅在腫瘤患者體內(nèi)存在，在正常人體內(nèi)也存在，因此檢測(cè)腫瘤相關(guān)抗原作為診斷依據(jù)可信性差。而抗原表位在正常人體內(nèi)含量很低檢測(cè)不到或根本不存在，若體內(nèi)抗原表位水平明顯增高，則表明體內(nèi)存在異常免疫情況，表明體內(nèi)相關(guān)抗原水平發(fā)生波動(dòng)，預(yù)示疾病的存在或原有疾病加重。

近年來(lái)的研究表明，在惡性腫瘤體積發(fā)展到可用現(xiàn)代影像學(xué)技術(shù)檢出之前3-5年，患者血中可出現(xiàn)高濃度的腫瘤相關(guān)抗原抗原表位。因此，檢測(cè)血中腫瘤相關(guān)抗原抗原表位具有預(yù)測(cè)腫瘤發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)和早期診斷腫瘤的重要價(jià)值，是腫瘤臨床診斷領(lǐng)域的重點(diǎn)發(fā)展方向之一。在國(guó)外已有診斷肺癌和乳腺癌的早期診斷試劑盒市售。然而，目前所報(bào)道的抗體檢測(cè)方法敏感度低，特異性差，假陰性比率可高達(dá)50％以上，其主要原因是由于每一種腫瘤相關(guān)抗原抗原表位在患者中的陽(yáng)性檢測(cè)率平均在10％左右，如何提高診斷試劑敏感度是當(dāng)前需要亟待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。比較行之有效的方法是尋找新的可充當(dāng)腫瘤標(biāo)志物的抗原表位，然后與現(xiàn)有已知的抗原表位組合成具有敏感度高和特異性強(qiáng)的診斷試劑盒。

多重腫瘤抑制基因p16，又名p35，位于人類(lèi)9號(hào)染色體的短臂(9p21)，編碼分子量為16KD的蛋白—P16，此蛋白位于細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi)。除腦、骨骼和肌肉外，廣泛地表達(dá)于各種組織器官。在功能上，P16對(duì)細(xì)胞周期起負(fù)性調(diào)節(jié)作用，可以抑制細(xì)胞周期關(guān)鍵酶-CDK4和CDK6，阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期。腫瘤患者常合并P16基因的突變、異常或缺失，從而影響P16蛋白的功能，P16表達(dá)異常會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖。當(dāng)患者接受化療、放療后，腫瘤細(xì)胞死亡會(huì)釋放出大量的P16蛋白的碎片，誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗原表位。在國(guó)內(nèi)關(guān)于胃腺癌、卵巢漿液性囊腺癌及子宮內(nèi)膜癌的研究中發(fā)現(xiàn)，癌組織中P16基因表達(dá)呈上升趨勢(shì)，但到了癌癥中、晚期其表達(dá)率反而低于癌癥早期，這提示P16可能成為區(qū)分病變的良惡性和病情嚴(yán)重性以及預(yù)后判斷的有效指標(biāo)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種檢測(cè)食管癌標(biāo)志物P16抗原表位氨基酸序列及應(yīng)用，通過(guò)自行設(shè)計(jì)的P16的抗原表位多肽，檢測(cè)食管癌患者血清及血漿中抗原表位水平并開(kāi)發(fā)相應(yīng)的試劑，預(yù)測(cè)腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)性，并為腫瘤新藥研究提供可靠的數(shù)據(jù)。。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：提供一種檢測(cè)食管癌標(biāo)志物P16抗原表位的氨基酸序列為SEQ ID No.1：N-SDTAVNIDNFLSRYAEQHRNELQMQLTA-C。

其純度95％，pH7.0。

本發(fā)明所述的P16抗原多肽在制備食管癌早期診斷試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明利用自行設(shè)計(jì)的P16蛋白的線性多肽，采用ELISA法檢測(cè)食管癌患者血清及血漿中抗P16蛋白的特異性自身IgG抗體，該反應(yīng)具有高特異性和高靈敏性。自身IgG抗體水平升高表明腫瘤患者體內(nèi)P16蛋白的表達(dá)量增加，預(yù)示患者可能出現(xiàn)原發(fā)性或繼發(fā)性腫瘤，可以預(yù)測(cè)腫瘤發(fā)生與復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)性，指導(dǎo)臨床醫(yī)生對(duì)腫瘤的早期診斷，P16抗原多肽可用于制備腫瘤早期診斷試劑盒。

附圖說(shuō)明

圖1是P16抗原多肽與血漿IgG結(jié)合的SBI曲線圖；

圖2是P16抗原多肽檢測(cè)食管癌的ROC曲線圖。

具體實(shí)施方式