[發明專利]一種提高動物卵母細胞體外成熟質量的培養液及培養方法

在審

• 申請號: 202110799469.6
• 申請日: 2021-07-15
• 公開（公告）號: CN113308435A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 羅明久;蔣琳;鄭麗艷;鞏帥;苑紅杰;張杰;張衍俊;高雁;華琦;張閩;孫廣義;寧淑芬
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;A01N1/02
• 代理公司: 沈陽一諾君科知識產權代理事務所(普通合伙) 21266
• 代理人: 劉麗娟

本發明公開了一種提高動物卵母細胞體外成熟質量的培養液及培養方法，具體涉及卵細胞培養技術領域，其所使用的主要包括以下成分及其重量份：M199培養液、5?15IU/ML的LH、5?15ng/ml的EGF、5?15IU/ML的FSH、85?100IU/ML的青霉素、0.5?1mm的丙酮酸納、0.5?1.5μg/ML的17β?雌二醇、2.5?11ng/ML的運鐵蛋白和5％?20％的血清。本發明通過在培養液內加入多種刺激卵細胞成熟發育的激素，配合多種蛋白和殺菌效果，使卵細胞發育成長，在對卵細胞培養過程中配合適當的溫度、濕度、空氣和養分能夠使卵細胞在適當的環境下正常發育，提高了卵細胞體外成熟的質量，促進動物胚胎和受精后發育的胚胎的質量，提高動物的繁殖能力。

技術領域

本發明涉及卵細胞培養技術領域，更具體地說，本發明涉及一種提高動物卵母細胞體外成熟質量的培養液及培養方法。

背景技術

卵細胞也稱卵子或雌性生殖細胞，一般是球形或卵圓形，較精子大，多數卵細胞是不活動的，含有大量的營養物質，卵細胞是生殖器官中的卵原細胞經過初級卵母細胞、次級卵母細胞等發育階段，最后成為卵細胞，高等動物的卵原細胞存在于胚胎期，出生后便生長為卵母細胞，長到足夠大的初級卵母細胞經過減數分裂I，排出第一極體而成為次級卵母細胞，次級卵母細胞經過減數分裂II以及有關發育過程才成為卵細胞；

培養液是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養料,一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)以及維生素和水等

目前的卵細胞體外成熟技術是將動物體內的卵泡取出，并通過培養液進行人工培養，使培養液成熟后在植入動物體內的卵巢內，使成熟的卵泡進行受精發育，但是目前動物卵細胞體外發育的質量不佳，導致卵細胞發育不正常，進而影響卵母細胞的生長發育。

發明內容

為了克服現有技術的上述缺陷，本發明的實施例提供一種提高動物卵母細胞體外成熟質量的培養液及培養方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種提高動物卵母細胞體外成熟質量的培養液，其所使用的主要包括以下成分及其重量份：M199培養液、 5-15IU/ML的LH、5-15ng/ml的EGF、5-15IU/ML的FSH、85-100IU/ML的青霉素、 0.5-1mm的丙酮酸納、0.5-1.5μg/ML的17β-雌二醇、2.5-11ng/ML的運鐵蛋白和5％-20％的血清。

在一個優選地實施方式中，所述M199培養液、8-12IU/ML的LH、7-15ng/ml 的EGF、10-15IU/ML的FSH、90-100IU/ML的青霉素、0.8-1mm的丙酮酸納、 0.8-1.5μg/ML的17β-雌二醇、2.8-10ng/ML的運鐵蛋白和10％-20％的血清。

在一個優選地實施方式中，所述M199培養液、11IU/ML的LH、10ng/ml的 EGF、12IU/ML的FSH、95IU/ML的青霉素、0.9mm的丙酮酸納、1μg/ML的17β- 雌二醇、6ng/ML的運鐵蛋白和15％的血清。

一種提高動物卵母細胞體外成熟質量的培養方法，包括以下步驟：

步驟一、卵巢提取：從動物體內抽取新鮮卵巢，選取的動物健康程度相同，將抽取后的新鮮卵巢放入恒溫生理鹽水中，工作人員在1-3H內將提取后的卵巢輸送至實驗室內，以保證卵巢的新鮮，實驗室溫度控制在36℃左右；

步驟二、原料準備：將權利要求3中的所述M199培養液、11IU/ML的LH、 10ng/ml的EGF、12IU/ML的FSH、95IU/ML的青霉素、0.9mm的丙酮酸納、1μg/ML 的17β-雌二醇、6ng/ML的運鐵蛋白和15％的血清準備好，選取四種相同大小的容器，將所準備的材料分別放入到四種相同大小的容器內備用，容器在使用前首先經過清洗、消毒；

步驟三、培養液制備：