[發明專利]鼠抗（1,3）-β-D葡聚糖雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用

有效

• 申請號: 202110798709.0
• 申請日: 2021-07-15
• 公開（公告）號: CN113249336B
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 苑慶華;何永勝;周躍輝;臧丹戎;樊琳琳;劉騫;馬秀楠;張文倩
• 申請（專利權）人: 天津一瑞生物科技股份有限公司;北京金山川科技發展有限公司;天津喜諾生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C12N15/13;C07K16/44;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/58;C12R1/91
• 代理公司: 天津諾德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 12213
• 代理人: 欒志超;王旭

本發明提供兩種鼠抗（1,3）?β?D葡聚糖雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用，通過小鼠雜交瘤單克隆抗體篩選及RT?PCR法克隆Ig可變區基因，獲得穩定分泌抗（1,3）?β?D葡聚糖抗體的雜交瘤細胞株及其可變區序列，并用ELISA方式對抗體結合特異性進行了鑒定，為抗（1,3）?β?D葡聚糖基因工程抗體的研發奠定了基礎；該鼠源抗（1,3）?β?D葡聚糖單克隆抗體與（1,3）?β?D葡聚糖反應高效價，且結合特異性強，可用于（1,3）?β?D葡聚糖的檢測，以該抗體為原料開發的檢測試劑盒具備很好的臨床應用價值。

技術領域

本發明屬于抗體制備技術領域，尤其是涉及鼠抗（1,3）-β-D葡聚糖雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用。

背景技術

葡聚糖（Glucan）是真菌細胞壁的特征和主要成分。根據種類，可以分為不同的葡聚糖多糖。這些多糖不同之處在于D-葡萄糖單體的鍵合可以是α-或β-構型并形成1,3、1,4或1,6 O-糖苷鍵。連接鍵和聚合物長度定義了葡聚糖大分子的物理性質，其可以形成其他細胞壁結構的支架并影響壁的剛性和彈性。 β-1,3-葡聚糖對許多真菌病原體的生存能力至關重要。真菌細胞壁β-葡聚糖也是一種重要的病原體相關分子模式（PAMP）。為了躲避先天免疫，許多真菌病原體依賴于細胞壁α-葡聚糖的合成，該α-葡聚糖的功能是作為一種隱身分子來掩蓋β-葡聚糖本身或將其他掩蓋結構連接至細胞壁。

β-葡聚糖（β-glucans）是真菌和細菌細胞壁內最豐富的多糖類型之一。盡管所有β-葡聚糖均由通過（1-3），（1,4）或（1,6）線性β-糖苷鏈連接在一起的葡萄糖分子組成，但葡聚糖的類型在長度和分支結構上有所不同，其中分支可能附著在骨架上的不同位置，由一到多個單糖苷單元組成。根據定義，構成β-葡聚糖的D-吡喃葡萄糖聚合物以β端基異構體連接，而α-D-葡聚糖將其D-吡喃葡萄糖單元以α構型連接。從核心糖苷鏈上的分支通常是（1-4）或（1-6），其中真菌β-葡聚糖通常具有（1-3）連接的主鏈和（1-6）側鏈，而細菌則傾向于具有（1-4）側鏈。真菌β-葡聚糖本身具有豐富的結構多樣性，并已從多種真菌來源中分離出來。造成人類霉菌病的許多生物（包括白色念珠菌，煙曲霉和隱球菌）產生的壁富含β-（1,3）-葡聚糖，它一直是并且仍然是深入學習的重點。因此，檢測β-（1,3）-葡聚糖抗原不僅可以幫助臨床早期發現真菌感染并進行早期干預，還可以對治療效果進行監測和評估，同時對患者的臨床結果起到提示作用。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明提供鼠抗（1,3）-β-D葡聚糖雜交瘤細胞株，單克隆抗體及應用。

本發明采用的技術方案是：鼠抗（1,3）-β-D葡聚糖雜交瘤細胞株，命名為AG10，保藏編號為CGMCC No.21918；或者，命名為DD1，保藏編號為CGMCC No.21919。

鼠抗（1,3）-β-D葡聚糖單克隆抗體，抗體AG10包括重鏈可變區和輕鏈可變區，重鏈可變區包括如SEQ ID NO:1所示的CDRH1、SEQ ID NO:2所示的CDRH2和SEQ ID NO:3所示的CDRH3，輕鏈可變區包括如SEQ ID NO:4所示的CDRL1、SEQ ID NO:5所示的CDRL2和SEQ IDNO:6所示的CDRL3；

SEQ ID NO:1

GFNIKDYYMH

SEQ ID NO:2

WIDPEHGDTEYAPKFQG

SEQ ID NO:3

YGNFWYFNV

SEQ ID NO:4

SASSSVSYLH

SEQ ID NO:5

DTSKLSS

SEQ ID NO:6