[發明專利]一種魚源膠原蛋白的制備方法

在審

• 申請號: 202110797293.0
• 申請日: 2021-07-14
• 公開（公告）號: CN113603768A
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 傅維擎;黃兆輝;解江冰
• 申請（專利權）人: 煙臺德勝海洋生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C07K1/14;C07K1/16;C07K1/20;C07K1/22;C07K1/30;C07K1/34;C07K1/36;C12P21/06
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營;榮文英

1.一種魚源膠原蛋白的制備方法，包括以下步驟：

(1)將魚皮精細化處理，清洗處理后的魚皮并瀝干；

(2)將處理好的魚皮置于低于10℃的環境下，使用超聲波輔助酸提取法提取所述魚皮中的膠原蛋白20-30小時，優選24小時；

(3)在低于10℃的環境下，向步驟(2)所得的提取液中加酶進行酶解，并過濾除去固體雜質，得到粗制膠原蛋白液；

(4)將步驟(3)中獲得的粗制膠原蛋白液經鹽析、離心棄上清后重溶，配置成0.05％～0.50％濃度，優選0.10％～0.35％濃度的膠原蛋白液；

(5)將步驟(4)中所得的膠原蛋白液經二次純化后凍干，得到高純度的膠原蛋白。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述魚皮精細化處理包括魚皮真皮側薄膜組織的去除、魚皮表皮層和基底膜層的去除、流動水攪拌清洗、魚皮的切割和魚皮脫腥脫脂。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述魚皮脫腥脫脂利用脫腥脫脂劑進行處理，所述脫腥脫脂劑包括甲醇、乙醇、異丙醇、氫氧化鈉、氫氧化鉀中的一種或幾種，所述脫腥脫脂劑的濃度是1％～15％，優選3～10％，更優選6～8％，脫腥脫脂的時間是12～60h。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，對于所述超聲波輔助酸提取法，酸包括磷酸、乳酸、鹽酸、乙酸、檸檬酸中的一種或幾種；優選地，所述酸的濃度為0.5～5％(v/v)，底物與所述酸之比為1:10～1：80(w/v)。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述超聲波輔助酸提取法包括先后用兩種不同超聲頻率的超聲波輔助酸提取膠原蛋白；優選地，先使用的超聲波功率為60～100W，后使用的超聲波功率為80～120W；更優選地，前12小時的超聲波功率為60～100W，后12小時的超聲波功率為80～120W。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述酶解包括加酶以及在不高于10℃環境下酶解膠原蛋白4～24h；所述酶包括胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶中的一種或幾種；所述酶的濃度為0.05～0.5％(w/w)。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述鹽析中使用的鹽包括氯化鈉、硫酸銨、硫酸鈉、氯化鎂、硫酸鋁、氯化銨、硫酸鎂中的一種或幾種，鹽濃度為5％～20％。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述二次純化包含柱層析和二段超濾；

優選地，所述柱層析為凝膠柱層析、親和柱層析、疏水柱層析中的一種；

優選地，所述二段超濾為使用兩塊不同分子量的超濾膜包對膠原蛋白液進行純化除雜；更優選地，初次超濾使用小分子量的超濾膜包，收集回流液，第二次超濾使用大分子量的超濾膜包，收集過膜后的濾液；特別地，所述兩塊超濾膜包截留分子量為10～1000kDa之間，更優選為50～500kDa之間。

9.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述的魚皮為鱈魚皮、三文魚皮、鰻魚皮、馬鮫魚皮、羅非魚皮、金線魚皮、帶魚皮、黃瓜魚皮中的一種。

10.根據權利要求1-9中任一項所述的制備方法獲得的膠原蛋白。