[發明專利]一種牛源肝素鈉的提取精制方法

在審

• 申請號: 202110796655.4
• 申請日: 2021-07-14
• 公開（公告）號: CN113698501A
• 公開（公告）日: 2021-11-26
• 發明（設計）人: 李志敏;劉力波;田志鵬;白文舉;崔潔;孫鵬;郄正剛;胡立娜;趙永杰
• 申請（專利權）人: 河北常山生化藥業股份有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司 13100
• 代理人: 張曉龍

本發明涉及一種牛源肝素鈉的提取精制方法，將牛源粗品肝素溶解后經鹽解、酶解、柱層析離子交換、醇沉、氧化、過濾、沉淀、干燥等步驟制得，本發明開創了國內牛源肝素鈉生產先河，使得牛臟器得以充分利用，解決了國內一直以來對豬源肝素的依賴。本發明適于規模化生產，產品質量具有高活性、高分子量、高純度等優勢。

技術領域

本發明屬于生物制藥領域，涉及牛源肝素鈉的提取精制方法，尤其涉及以牛源粗品肝素為起始原料提取精制牛源肝素鈉的方法。

背景技術

1939年，全球第一個上市的藥用肝素（商品名Liqueamin）來源于牛肺臟，20世紀50年代以來由于豬小腸黏膜的易獲得性以及瘋牛病的爆發，使得豬小腸來源的肝素鈉逐漸成為牛源肝素鈉的替代品。但是隨著瘋牛病得到控制，以及全球市場對肝素產品消費的日益增長，伊斯蘭國家對牛源肝素的大量需求，非洲豬瘟導致的生豬數量的銳減，使得牛源肝素鈉重返市場的形式迫在眉睫。

我國的貴州貴陽、新疆伊利和庫爾勒、河南鄭州、福建泉州、吉林長春等地先后嘗試牛源粗品肝素的生產，但均因原料來源短缺和粗品銷售等原因，無法維持和發展。目前，國內還沒有專業化的牛源肝素鈉生產廠家，國內純化牛源粗品肝素的方法較為粗略，制得的牛源肝素鈉或者雜質含量較高，或者活性偏低，或者產品收率較低，或者工藝復雜不利于規?；a。牛源粗品肝素的特點是顏色較深、效價較低，采用傳統方法很難獲得符合出口標準的產品。

國外市場有少量的牛源肝素，例如巴西的EXTRASUL是牛源肝素鈉的原料藥和制劑銷售公司，Kin Master Produtos Quimicos Ltda.和Wegmed Caminhos Medicinais Ltda.兩家公司僅有牛源肝素鈉原料藥產品；馬來西亞的AIN MEDICARE SDN. BHD.和印尼的PTPratapa Nirmala (Fahrenheit)兩家公司僅有牛源肝素鈉的制劑產品，其原料藥從巴西進口。國外僅有屈指可數的幾個國家生產經營牛源肝素鈉產品，且因原料來源緊張、供不應求而無法滿足全球市場需求。

全球穆斯林人口約有20億，再加上印度教和猶太教等兼容市場，總人口超過23億，約占全球人口的1/3，對肝素鈉的原料需求為每年度50噸左右，市場容量保守估計約為20-30億美元。牛源肝素鈉具有巨大的市場開發潛力。

發明內容

本發明的目的是提供一種可獲得高效價、高分子量、高純度的注射級牛源肝素鈉精品的牛源肝素鈉的提取精制方法，以克服肝素鈉來源于單一物種的限制，滿足市場需求，降低肝素鈉單一物種來源的風險。

本發明采用如下技術方案：

一種牛源肝素鈉的提取精制方法，其包括如下步驟：

（1）鹽解：將牛源粗品肝素溶于純化水中，加入溶液體積1%~5%氯化鈉攪拌溶解，將溶液升溫至45~55℃，用鹽酸調溶液pH值8.0~9.0，保溫攪拌1~3h；

（2）酶解：在步驟（1）的反應液中加入反應液質量0.1%~1%的蛋白酶，保溫45~55℃酶解3~5h，反應結束，將反應液迅速升溫至85~95℃，保溫10~30min；然后降溫至30℃以下；

（3）柱層析離子交換：將步驟（2）得到的酶解液經離子交換柱吸附，然后用1~2mol/L氯化鈉洗滌，洗滌10~15倍柱床體積時停止洗滌，換用5~8倍柱床體積的4~5mol/L氯化鈉溶液進行洗脫，收集洗脫液；

（4）超濾：使用超濾機將洗脫液超濾濃縮至原體積的1/5~1/4；

（5）醇沉：向步驟（4）所得濃縮液中加入95%乙醇，當加入的乙醇體積為濃縮液體積的0.8~1.2倍時，停止加入，攪拌10~30min，然后在15~35℃下靜置，靜置3~10h后沉淀物與上清液分層，收集沉淀物；

（6）氧化：將步驟（5）所得沉淀物加水溶解后，用氫氧化鈉溶液調節溶液pH為9.0~11.5，然后升溫到30~60℃，分3步加入濃度為30%的過氧化氫，氧化8~24h；