[發(fā)明專利]一種MERS-CoV S-RBD線性B細(xì)胞表位及其特異性識(shí)別單克隆抗體和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110795473.5
• 申請(qǐng)日: 2021-07-14
• 公開（公告）號(hào): CN113527446A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏薔;張改平;王愛萍;王攀;丁培陽(yáng);劉運(yùn)超;馮華;尚延麗;李青梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物免疫學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室
• 主分類號(hào): C07K14/165
• 分類號(hào): C07K14/165;C07K16/10;G01N33/569;G01N33/577;A61K39/215;A61P31/14
• 代理公司: 鄭州市華翔專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41122
• 代理人: 張愛軍

本發(fā)明涉及一種MERS?CoV S?RBD線性B細(xì)胞表位及其特異性識(shí)別單克隆抗體和應(yīng)用。利用HEK 293F細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)MERS?CoV S1重組蛋白，經(jīng)純化獲得高純度、具有生物學(xué)活性和免疫原性的目的蛋白。隨后免疫小鼠獲得單克隆抗體；利用ELISA鑒定其中一株單克隆抗體6E8可特異性識(shí)別RBD?rFc蛋白；利用真核細(xì)胞HEK?293T重組表達(dá)MERS?CoVS?RBD重組蛋白不同片段，通過Dot?blot鑒定獲得的6E8單克隆抗體特異性識(shí)別MERS?CoV S?RBD N端區(qū)域；利用ELISA進(jìn)一步鑒定N端區(qū)域合成多肽，鑒定6E8單克隆抗體特異性識(shí)別序列為FTCSQIS的線性B細(xì)胞表位。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種MERS-CoV S-RBD線性B細(xì)胞表位及其特異性識(shí)別單克隆抗體和應(yīng)用，屬于分子生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

中東呼吸綜合征(Middle East Respiratory Syndrome，MERS)是由中東呼吸綜合征冠狀病毒(Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus，MERS-CoV)引起的一種傳染性和高致死性的呼吸系統(tǒng)疾病，主要表現(xiàn)為非典型性肺炎和急性呼吸綜合征，嚴(yán)重者可引發(fā)腎衰竭而死亡。中東呼吸綜合征冠狀病毒S蛋白(棘突糖蛋白，spike glycoprotein)是三聚體狀態(tài)的I型跨膜糖蛋白，位于病毒膜表面，介導(dǎo)病毒附著宿主細(xì)胞及病毒-細(xì)胞膜的融合，是細(xì)胞靶向性和發(fā)病機(jī)制的主要決定因子。S蛋白包含S1亞基和S2亞基兩個(gè)功能子單元，其中S1亞基包含N端結(jié)構(gòu)域(N-terminal domain，NTD)和獨(dú)立折疊的受體結(jié)合域(receptor-binding domain，RBD)，RBD與細(xì)胞受體二肽激肽酶4(DPP4)結(jié)合，介導(dǎo)病毒顆粒附著于細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，全長(zhǎng)S蛋白、S1以及RBD均可作為開發(fā)MERS-CoV疫苗和治療抗體的靶點(diǎn)。因此S-RBD目前成為許多科研工作者的主要研究對(duì)象。然而，對(duì)于MERS-CoV S-RBD抗原表位鑒定及其免疫識(shí)別等問題尚有待全面解決。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種MERS-CoV S-RBD線性B細(xì)胞表位及其特異性識(shí)別單克隆抗體和應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種MERS-CoV S-RBD線性B細(xì)胞表位肽，所述表位肽的氨基酸序列為：FTCSQIS。

一種單克隆抗體6E8，特異性識(shí)別含有所述的MERS-CoV S-RBD線性B細(xì)胞表位序列肽或蛋白。

所述單克隆抗體6E8是由保藏編號(hào)為CCTCC NO:C2021159的雜交瘤細(xì)胞株6E8分泌，該雜交瘤細(xì)胞株6E8保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為武漢大學(xué)，保藏時(shí)間為2021年7月6日。

所述的MERS-CoV S-RBD線性B細(xì)胞表位肽在制備MERS診斷試劑或藥物中的應(yīng)用。

編碼所述MERS-CoV S-RBD線性B細(xì)胞表位肽的核苷酸序列。

所述核苷酸序列為TTTACATGTAGCCAGATCTCT。

本發(fā)明有益效果：