[發明專利]蘆薈多糖用于制備家畜冷凍保存劑的應用

在審

• 申請號: 202110794880.4
• 申請日: 2021-07-14
• 公開（公告）號: CN113396895A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 李青旺;楊麗;王捷;裴一飛;吳琳;劉定幫
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 西安恒泰知識產權代理事務所 61216
• 代理人: 史玫

本發明公開了蘆薈多糖用于制備家畜精液冷凍保存劑的應用。本發明所公開的方案是將蘆薈多糖用于制備家畜精液冷凍保護劑，用于豬、羊和牛細管冷凍精液長期保存、人工授精及精液超低溫冷凍后的長途運輸后輸精，可顯著提高冷凍?解凍后豬、羊和牛精子活率、頂體完整率和質膜完整率。

技術領域

本發明屬于哺乳動物精液的超低溫冷凍保存技術領域，具體涉及蘆薈多糖作為抗凍保護劑在家畜精液冷凍保中的應用。

背景技術

精子冷凍技術是人工授精的重要革新，不僅解決了雄性動物精液的長期保存問題，便于保存遺傳資源，而且應用方便，不受時間及空間的限制，在開展省際、國際之間畜牧業的協作，在建立全球優良物種基因庫等方面起到重要作用。精子冷凍技術的廣泛應用，有利于擴大優秀種公畜的利用率，減少公畜的飼養量，減少經濟成本，提高了畜牧業效益，尤其在人工授精領域方面起到重要的作用。精液冷凍技術對我國及國際的畜牧業可持續發展和畜產品的滿足供應具有重要現實意義。

精子冷凍保存，需要經過一系列的程序降溫處理，最終將精子置于液氮(-198℃)中，由于精子對溫度變化比較敏感，在冷凍降溫的過程中，精子容易遭受冷凍損傷，主要包括物理性損傷、化學性損傷和氧化性損傷。跟新鮮精液相比，冷凍-解凍后的精子，其活率、頂體完整率、線粒體活性、DNA完整率和膜完整率顯著下降。而精子質量的好壞，與妊娠率、分娩率和窩產仔數密切相關。目前為止，冷凍精液人工授精技術已經應用于養牛生產，在奶牛繁殖和改良方面應用最為普及。但冷凍解凍后，依然有40％-50％精子失去活性，嚴重降低了良種公牛的利用率。而豬精子和羊精子對于冷凍刺激更為敏感，解凍后精子復蘇率低，異常精子多，受胎率低于正常受胎率，故豬精子和羊精子冷凍還處于試驗階段。

發明內容

針對目前家畜精液冷凍的缺陷或不足之處，本發明提供了蘆薈多糖用于制備家畜精液冷凍保存劑的應用，所述家畜為豬、牛或羊。

進一步，本發明還提供了一種家畜精液冷凍保護劑。所述家畜精液冷凍保護劑包括冷凍基礎液、蛋黃和蘆薈多糖；100mL家畜精液冷凍保護劑中蘆薈多糖添加量為2mg-60mg，100mL家畜精液冷凍保護劑中蛋黃添加量為15mL-25mL；所述冷凍基礎液的配方為：葡萄糖1.1g，檸檬酸1.48g，Tris2.42g，青霉素鈉0.06g，硫酸鏈霉素0.1g，雙蒸水100mL。

本發明的另一種家畜精液冷凍保護劑包括冷凍基礎液、蛋黃、蘆薈多糖和甘油；100mL家畜精液冷凍保護劑中蘆薈多糖添加量為2mg-60mg，100mL家畜精液冷凍保護劑中蛋黃添加量為15mL-25mL，100mL家畜精液冷凍保護劑中甘油的添加量為6mL-12mL；所述冷凍基礎液的配方為：葡萄糖1.1g，檸檬酸1.48g，Tris2.42g，青霉素鈉0.06g，硫酸鏈霉素0.1g，雙蒸水100mL。

本發明還提供了上述家畜精液冷凍保護劑的制備方法。所提供方法包括：

1)取配方量的葡萄糖、檸檬酸、Tris、青霉素鈉、硫酸鏈霉素、溶于雙蒸水中，定容，調節pH至6-6.5，滲透壓280-290mosm/L，配制成冷凍基礎液；

2)將步驟1)得到的冷凍基礎液與配方量蛋黃和蘆薈多糖混勻后配制成Ⅰ液；

3)向步驟2)所配制的Ⅰ液，加入配方量甘油混勻，pH值調整至6.0～7.5，滲透壓調至280-290mosm/L，滅菌后制成Ⅱ液。

具體的，100mL家畜精液冷凍保護劑或Ⅰ液中蘆薈多糖添加量為4mg-40mg、2mg-35mg或6mg-60mg。

本發明的有益效果是：

本發明首次將蘆薈多糖作為冷凍抗凍劑用于家畜精液冷凍保存，制備方法簡單，取材容易，效果可靠，易于推廣，適用于家畜細管冷凍精液人工授精及精液超低溫冷凍后的長期保存和長途運輸后輸精，可顯著提高冷凍-解凍后精子活率、頂體完整率和質膜完整率，保持精子的受精活力。

具體實施方式