[發明專利]用于肝靶向和治療的CRISPR-CAS系統、載體和組合物的遞送與用途

在審

• 申請號: 202110793075.X
• 申請日: 2014-06-10
• 公開（公告）號: CN113425857A
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 張鋒;叢樂;然霏
• 申請（專利權）人: 布羅德研究所有限公司;麻省理工學院;哈佛大學校長及研究員協會
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P1/16;A61P3/06;A61P43/00;C12N9/22;C12N15/113
• 代理公司: 北京華睿卓成知識產權代理事務所(普通合伙) 11436
• 代理人: 程淼

1.包含CRISPR-Cas系統的組合物在制備用于在受試者體內治療肝臟疾病或障礙的藥物中的用途，其中所述CRISPR-Cas系統包含：

I.多核苷酸序列，其包含：(a)指導序列，所述指導序列能夠雜交到肝臟細胞中表達的并與肝臟疾病或障礙中涉及的基因相關的肝靶序列上，(b)tracr配對序列，和(c)tracr序列，其中(a)、(b)和(c)按5’至3’的方向排列，以及

II.編碼Cas9的多核苷酸序列，所述Cas9包含至少一個核定位信號(NLS)；

其中所述tracr配對序列雜交到所述tracr序列上，并且所述指導序列引導CRISPR復合物與肝臟細胞中表達的所述肝靶序列特異性結合，其中所述CRISPR復合物包含與(1)雜交到所述靶序列上的所述指導序列，和(2)雜交到所述tracr序列上的所述tracr配對序列復合的Cas9，其中所述編碼Cas9的多核苷酸序列是RNA，并且中所述CRISPR-Cas系統通過脂質納米粒子遞送。

2.如權利要求1所述的用途，其中所述CRISPR-Cas系統能夠改變所述受試者的肝臟中基因產物的表達，由此產生表型改變。

3.如權利要求1或2所述的用途，其中所述Cas9包含至少兩個NLS。

4.如前述權利要求任一項所述的用途，其中所述Cas9是化膿鏈球菌Cas9。

5.如前述權利要求任一項所述的用途，其中所述Cas9是金黃色葡萄球菌Cas9。

6.如前述權利要求任一項所述的用途，其中所述Cas9通過選自D10A、E762A、H840A、N854A、N863A和D986A的一個或多個突變被突變為切口酶。

7.如前述權利要求任一項所述的用途，其中所述Cas9融合至一個或多個異源蛋白結構域上。

8.如權利要求7所述的用途，其中所述異源蛋白結構域具有下列活性的一者或多者：甲基酶活性、脫甲基酶活性、轉錄激活活性、轉錄阻遏活性、轉錄釋放因子活性、組蛋白修飾活性、RNA切割活性或核酸結合活性。

9.如前述權利要求任一項所述的用途，其中所述指導序列、所述tracr配對序列和所述tracr序列被包含在CRISPR-Cas系統嵌合RNA中。

10.如前述權利要求任一項所述的用途，其中所述組合物包含兩個或更多個靶向不同肝靶序列的CRISPR-Cas系統嵌合RNA。

11.如前述權利要求任一項所述的用途，其中所述組合物進一步包含用于靶向基因插入的外源多核苷酸。

12.如前述權利要求任一項所述的用途，其中所述肝靶序列表達PCSK9、HMGCR、SERPINA1、APOB、LDLR、ANGPTL3、F8、F9/FIX、AAT、FAH、HPD、TAT、ATP7B、UGT1A1、OTC、ARH或TTR。

13.如權利要求1-11任一項所述的用途，其中所述肝靶序列是PCSK9，并且所述肝臟疾病或障礙是脂類代謝障礙。

14.如權利要求1-11任一項所述的用途，其中所述肝靶序列是轉甲狀腺素蛋白(TTR)，并且所述肝臟疾病或障礙是淀粉樣變性。

15.如權利要求1-11任一項所述的用途，其中所述肝靶序列是SERPINA1，并且所述肝臟疾病或障礙是α-1抗胰蛋白酶缺乏。

16.如權利要求1-11任一項所述的用途，其中所述肝臟疾病或障礙是高膽固醇血癥或高血脂癥。