[發明專利]快速檢測病毒的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 202110793070.7
• 申請日: 2021-07-14
• 公開（公告）號: CN113402604B
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 馬紅妙;張玲
• 申請（專利權）人: 河北精碩生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/52
• 代理公司: 江蘇長德知識產權代理有限公司 32478
• 代理人: 湯小權

本發明公開了一種快速檢測病毒的試劑盒及其制備方法。本發明篩選獲得特異性識別呼吸道合胞病毒F抗原單克隆抗體，將所述單克隆抗體標記量子點和其他抗體標記的硝酸纖維素膜制備獲得抗體熒光量子點快速檢測試紙，同時針對呼吸道合胞病毒P蛋白的基因序列進行分析，選取保守區設計RPA引物和探針，并制備成為相應的檢測試紙條；將兩個檢測方法進行組合使用，能夠進一步提高檢測的準確性，從而及早診斷，利于患者盡快治療，適于大規模推廣使用。

技術領域

本申請涉及生物檢測領域,并且更具體地涉及快速檢測病毒的試劑盒及其制備方法。

背景技術

呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)是屬于副粘病毒科，肺炎病毒屬的單股負鏈RNA病毒，被認為是引起嬰幼兒急性下呼吸道感染的最主要的病原體，也是世界范圍內1歲以下嬰兒的主要死亡原因之一。在世界不同地區每年因RSV感染而需住院治療的患兒為1％-5％，住院患兒病死率為1％-3％。RSV可通過多種途徑傳播，主要通過咳嗽或打噴嚏釋放含病毒顆粒的飛沫或間接接觸感染病人的呼吸道分泌物后擦拭眼或鼻。不同年齡的人感染RSV后的主要臨床癥狀可能不同，嬰幼兒感染RSV后，多出現高熱、鼻炎、咽炎及喉炎等癥狀，還可能為細支氣管炎及肺炎等較嚴重的下呼吸道疾病，更嚴重者可能發展為神經性疾病，少數患者伴有中耳炎、胸膜炎及心肌炎等并發癥；大齡兒童和成人感染RSV后，主要表現為上呼吸道感染癥狀。對于有基礎疾病的患者，如本身有心肺疾病(先天性心臟病或肺發育不良等)、免疫抑制或缺陷等，感染RSV后更易轉為重癥患者。

RSV病毒的基因組約有15191-15226個核苷酸(nt)，可編碼11種蛋白質。其中G、F、SH蛋白為RSV跨膜糖蛋白，其中F和G蛋白可介導病毒與細胞、細胞間的黏附和穿膜入胞。F蛋白相對保守，G蛋白高度可變，根據G蛋白基因的不同，RSV主要分為RSV-A、RSV-B兩個抗原亞型。M、M2-1、M2-2為基質蛋白，N、P和L三種蛋白相互作用構成核衣殼，NS1、NS2為非結構蛋白。

RSV感染的病例多表現為發熱、咳嗽和流涕等呼吸道感染癥狀，會與其他呼吸道相關病毒混淆，所以從臨床癥狀上來判斷患者是否被RSV感染并不可靠，建立一種高效快速、準確的檢測方法就顯得尤為重要。對于RSV早期準確診斷不僅對于臨床管理很重要，也能夠起到防范和控制RSV傳播的作用。

目前RSV的檢測方法主要有病毒分離培養、免疫學檢測和病原學檢測。病毒培養需要有活病毒存在才能實現，操作繁瑣且耗時長。病原學檢測精準性高、檢測時間短，但是設備昂貴，檢測費用高，易出現假陽性。免疫免疫學方法檢測時間短，但靈敏度低，對于低濃度感染樣本的檢測效果不理想。因此，現有方法的臨床敏感性不是十分理想。

申請內容

為了更好規避以上缺陷,為患者提供盡早、準確的診斷結果，提供了一種制備簡單、成本低廉、使用方便、不需要高精尖儀器、更為準確、高效的檢測試劑盒。所述試劑盒通過核酸-抗體雙重檢測方法對呼吸道合胞病毒進行檢測，能更有效檢測呼吸道合胞病毒及其基因分型(即是否攜帶毒素B基因),從而及早診斷，利于患者盡快治療，并且避免過度治療。

本申請提供以下技術方案：

本申請提供一種特異性結合呼吸道合胞病毒F抗原的單克隆抗體R309，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，該重鏈可變區含有CDR1區、CDR2區和CDR3區，重鏈CDR1區、CDR2區和CDR3區的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:1、2和3所示；該輕鏈可變區含有CDR1區、CDR2區和CDR3區，其中輕鏈CDR1區、CDR2區和CDR3區的氨基酸序列分別如SEQ ID NO:4、5和6所示。

另一方面，本申請提供一種特異性結合呼吸道合胞病毒F抗原的單克隆抗體R309，其包含重鏈可變區和輕鏈可變區，其中重鏈可變區包含氨基酸序列SEQ ID NO:7，輕鏈可變區包含氨基酸序列SEQ ID NO:8。