[發明專利]一種快速血管化的組織工程皮膚及其構建方法

在審

• 申請號: 202110792152.X
• 申請日: 2021-07-13
• 公開（公告）號: CN113416690A
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 明磊國;王清霞;王哲;董玲娟
• 申請（專利權）人: 陜西中鴻科瑞再生醫學研究院有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、將人臍帶來源內皮祖細胞配置成濃度為0.5-5×10⁶個/ml的細胞懸濁液，將裝載有血管形成相關因子的微載體置于懸濁液中進行接種，所述微載體包括一種微球和兩種微管，皆為中空結構，微球直徑20-50μm，微管為取向納米纖維管，第一類直徑10-20μm，長度200-300μm，記作微管I，第二類直徑30-50μm，長度50-100μm，記作微管II；三種微載體分開操作，接種了內皮祖細胞后，在培養箱中孵化1-2h，然后對每種細胞-微載體復合物單獨進行動態灌注脈沖培養10-20d，得到內皮祖細胞-微球復合物、內皮祖細胞-微管I復合物和內皮祖細胞-微管II復合物；

S2、將新生兒包皮組織來源成纖維細胞接種于水凝膠后與內皮祖細胞-微球復合物和內皮祖細胞-微管I復合物混合均勻，平鋪在培養容器中，厚度0.5-3mm，于37℃、5％體積分數CO₂的條件下培養7-10d，獲得真皮層；

S3、將人脂肪組織來源脂肪干細胞接種于水凝膠后與內皮祖細胞-微球復合物、內皮祖細胞-微管I復合物和內皮祖細胞-微管II復合物混合均勻，平鋪在培養容器中，厚度0.5-3mm，于37℃、5％體積分數CO₂的條件下培養1d后，開始成脂誘導培養，7-10d后獲得脂肪層；

S4、兩層組織按照S2的真皮層在上、S3的脂肪層在下的順序組合培養10-20d，獲得快速血管化的組織工程皮膚。

2.根據權利要求1所述的一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，S1中，所述微載體為可降解合成高分子材料，如聚己內酯、聚乳酸乙醇酸共聚物、聚乙醇酸酯、聚乳酸及其共聚物，或者天然高分子材料，如膠原蛋白、彈性蛋白、膠原蛋白的水解產物明膠、絲素蛋白、甲殼素中的一種或者多種。

3.根據權利要求2所述的一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，S1中，所述血管形成相關因子包括血管內皮生長因子、血小板衍生生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、肝細胞生長因子和促血管生成素中的一種或多種。

4.根據權利要求3所述的一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，S1中，動態灌注脈沖培養的參數為：流速30-60ml/min，脈沖頻率25-75次/min。

5.根據權利要求4所述的一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，S2中，成纖維細胞以0.5-5×10⁶個/ml的密度接種于水凝膠。

6.根據權利要求5所述的一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，S2和S3中，所述水凝膠材料均為透明質酸、海藻酸鈉、殼聚糖、纖維素、膠原蛋白、明膠和DNA中的一種或多種，材料形成三維網絡結構，所述三維網絡孔徑200μm。

7.根據權利要求6所述的一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，S2的培養容器中，微管I的密度50-200根/mm²，微球與微管I比例1：1。

8.根據權利要求7所述的一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，S3中，脂肪干細胞以0.5-5×10⁶個/ml的密度接種于水凝膠。

9.根據權利要求8所述的一種快速血管化的組織工程皮膚的構建方法，其特征在于，S3的培養容器中，微管I和微管II數量比為5-10：1，兩者密度合計50-200根/mm²，兩種微管數量之和與微球數量的比例為1：1。

10.權利要求1所述方法構建的組織工程皮膚。