[發明專利]一種同時檢測7種型別腺病毒的熒光定量PCR檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202110786237.7
• 申請日: 2021-07-12
• 公開（公告）號: CN113416797A
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 景寅;張夢;趙立明
• 申請（專利權）人: 北京華瑞康源生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 成都頂峰專利事務所(普通合伙) 51224
• 代理人: 楊俊華

本發明屬于人呼吸道病原體生物檢測技術領域，公開了一種同時檢測7種型別腺病毒的熒光定量PCR檢測試劑盒。該試劑盒引物是由感染人呼吸道7種型別腺病毒高保守區設計。實現了單管單重PCR即可同時檢測感染人呼吸道的7種型別腺病毒，且不會受其它感染人類腸道腺病毒型別及其它微生物序列影響，保證高覆蓋度、高靈敏性、高特異性和高準確性。對上述7種型別腺病毒建立進化樹模型及親緣關系分析，進行待檢片段特異性和敏感性評估后，挑選五聯體蛋白對應基因序列作引物結合位點。本試劑盒覆蓋型別廣，利用熔解曲線染料法，使檢測效率、特異性、敏感性、經濟型、便捷性，相比于常規的單管多重或多管單重檢測顯著提高。

技術領域

本發明屬于人呼吸道病原體生物檢測技術領域，具體涉及一種同時檢測7種型別腺病毒的熒光定量PCR檢測試劑盒。

背景技術

急性上呼吸道感染、急性氣管/支氣管炎、支氣管擴張/肺炎等是呼吸道感染的常見病，其臨床表現各有不同。呼吸道感染的病原體種類較多，一種臨床表現可由多個病原體引起，同時一個病原體也可造成多種臨床表現。因不能及時發現病原體，致使患者病情延誤或加重，同時也加重了抗生素的濫用。因此，及時、快速地對患者血清進行病原體檢測，及早明確病原體，對臨床診斷、治療及抗生素的規范使用有著重要的意義。

近年來，人腺病毒(HAdV)感染引起呼吸道傳染病時有發生，不僅對相關人群的健康造成嚴重危害，也為其家庭帶來了巨大經濟損失。人感染HAdV后可出現流感樣癥狀，且該病毒傳染性較強，對處于持續密集接觸場所的特定群體如軍營、學校等人員的影響較大。

HAdV屬于腺病毒科，哺乳動物腺病毒屬，是一種無包膜的雙鏈DNA病毒。其衣殼呈二十面體對稱，由252個殼粒組成，其中240個為六聯體，另12個為五聯體基底，每個五聯體基底上結合著1根纖突蛋白。不同型別的基因組長度范圍在26～45kb。

人腺病毒可分為多種型別，引起呼吸道疾病，也可感染消化道、泌尿道、眼部、心肌等部位而引起疾病。感染呼吸道的主要包括HAdV-B、HAdV-C和HAdV-E組，是呼吸道感染的重要病原之一。

我國北部、西北部和南部地區的優勢流行株屬于HAdV-B組，以3型和7型為主；而我國東部地區的優勢流行株屬于HAdV-C組，主要是1型、2型和5型；同時我國南方和北方近年多地均局部發生新型55型感染流行。

腺病毒的傳統分型方法主要為血清學分型方法。該種分型方法受限于病毒分離培養耗時長且操作要求嚴格，一般實驗室難以開展，同時對細胞病變的觀察受操作人員的主觀影響較大，結果可靠性不強。此外，當病毒毒株滴度很低時，也無法進行完整的血清學試驗，從而給分型造成困難。

隨著分子生物學技術的發展，出現了通過PCR擴增和基因測序等分子生物學技術來進行鑒定的方法。上述方法受限于腺病毒的型別眾多，我國地域遼闊，不同地區流行的HAdV的優勢基因型不同。重組導致的突變會使得為特定區域流行的幾個腺病毒型別設計的熒光定量PCR的引物及探針，在其它地域流行的不同型別腺病毒的序列不匹配，檢測易造成“脫靶”、“假陰性”，進而導致誤診、漏診狀況。

由于腺病毒重組率很高，不同型別間保守區域過于狹窄，倘若按照傳統方案采用一個型別使用一對引物及一條Taqman探針，這就意味著為了覆蓋7個型別，就需要在單管中實現7對引物及7條Taqman探針的7重PCR，一方面造成對單一型別檢測的靈敏度下降，另一方面也使得試劑成本成倍提高。

發明內容

為了解決現有技術存在的上述問題，本發明目的在于提供一種同時檢測7種型別腺病毒的熒光定量PCR檢測試劑盒。

本發明所采用的技術方案為：一種同時檢測7種型別腺病毒的熒光定量PCR檢測試劑盒，所述試劑盒包括腺病毒檢測液、內參基因檢測液、擴增反應液、陰性對照品、陽性對照品、內參質控品和無核酶水；