[發(fā)明專利]一種毛囊干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110784466.5
• 申請(qǐng)日: 2021-07-12
• 公開（公告）號(hào): CN113502259A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛志剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 同濟(jì)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/074
• 分類號(hào): C12N5/074;C12N5/071;A61K35/36;A61P17/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中;王永偉

1.一種毛囊干細(xì)胞的分離方法，其特征在于，包括：

S1、進(jìn)行毛囊的顯微剝離得到毛囊；

S2、在完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)毛囊，經(jīng)過純化后得到毛囊干細(xì)胞；所述完全培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、表皮生長(zhǎng)因子、胰島素、氫化可的松、L-谷酰胺、維生素A、維生素D2、轉(zhuǎn)鐵蛋白、亞油酸、牛血清白蛋白和胎牛血清。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述S1包括：取毛囊處皮膚，消毒后在體視鏡下用鑷子夾住毛囊靠近表皮的峽部，向真皮方向用力撕出毛囊；用針頭固定住毛囊，用解剖刀小心劃破真皮鞘，并將毛囊剝離出來，切斷真皮乳頭和真皮鞘間的連接。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述完全培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基、5-20ng/mL的表皮生長(zhǎng)因子、2-10μg/mL的胰島素、0.5-4μg/mL的氫化可的松、2-9mmol/L的L-谷酰胺、0.005-0.3μg/mL的維生素A、0.5-3μg/mL的維生素D2、0.5-3μg/mL轉(zhuǎn)鐵蛋白、50-200ng/mL的亞油酸、10-40μg/mL的牛血清白蛋白和10-25％的胎牛血清。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，將S1中得到的毛囊轉(zhuǎn)入培養(yǎng)容器中，加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3-7天。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述純化步驟包括：

在室溫的條件下，用消化液消化至成纖維細(xì)胞脫落，將成纖維細(xì)胞消化下來收集備用，再向培養(yǎng)板中加消化液，轉(zhuǎn)到37℃培養(yǎng)箱繼續(xù)消化3-5分鐘，用緩沖液收集消化下來的毛囊干細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在S2之后還包括步驟S3：將得到的毛囊干細(xì)胞進(jìn)行傳代；

優(yōu)選的，在S3中，將毛囊干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，加入完全培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)，每2-3天更換培養(yǎng)液，待毛囊干細(xì)胞匯合度達(dá)到80-90％進(jìn)行傳代。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述毛囊干細(xì)胞為人毛囊干細(xì)胞。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述方法得到的毛囊干細(xì)胞。

9.一種用于皮膚修復(fù)的產(chǎn)品，其特征在于，所述產(chǎn)品包括權(quán)利要求8所述的毛囊干細(xì)胞。

10.權(quán)利要求8所述的毛囊干細(xì)胞在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；優(yōu)選的，所述毛囊干細(xì)胞在皮膚修復(fù)領(lǐng)域中的應(yīng)用。