[發(fā)明專利]一種用于抑制采后果實(shí)腐敗病原菌的含鐵離子菌懸液及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110783915.4
• 申請(qǐng)日: 2021-07-12
• 公開（公告）號(hào): CN113430137B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周文文;葉婉瓊;聶麟杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A23B7/16;A23B7/155;C12R1/07
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 鄭海峰

本發(fā)明公開了一種用于抑制采后果實(shí)腐敗病原菌的含鐵離子菌懸液及其制備方法和應(yīng)用。通過在一定培養(yǎng)階段的芽孢桿菌菌懸液中添加金屬鐵離子提高芽孢桿菌生物膜的形成及抑制果實(shí)腐敗菌的能力。在體外，含有金屬化合物的菌懸液對(duì)水果腐敗菌(擴(kuò)展青霉、灰葡萄孢霉)的抑制效果顯著增強(qiáng)；在體內(nèi)，對(duì)櫻桃番茄、枇杷、梨貯藏中腐敗菌(擴(kuò)展青霉、灰葡萄孢霉)的抑制能力明顯提升。本發(fā)明建立生防菌株解淀粉芽孢桿菌B4(Bacillus amyloliquefaciens B4)生物被膜形成與其在生防作用中的聯(lián)系，外源添加金屬化合物顯著提高解淀粉芽孢桿菌B4生物被膜形成能力和對(duì)青霉、灰霉的體內(nèi)及體外抑制作用；操作簡(jiǎn)單，易于實(shí)用，有助于解淀粉芽孢桿菌產(chǎn)品化。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生防細(xì)菌在果實(shí)采后病害的生物防治技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種用于抑制采后果實(shí)腐敗病原菌的含鐵離子菌懸液及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

生物被膜是附著于惰性或活體表面的結(jié)構(gòu)性細(xì)菌群落，其中的細(xì)菌被包裹在水合胞外聚合物基質(zhì)網(wǎng)中。胞外聚合物主要是由多糖、蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)組成，它們?yōu)樯锉荒ぬ峁┝藱C(jī)械穩(wěn)定性，使細(xì)菌細(xì)胞互相連接并暫時(shí)固定不動(dòng)。而胞外聚合物中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的交換使得細(xì)菌形成相當(dāng)厚度生物被膜的同時(shí)，仍保持單個(gè)細(xì)胞在最佳營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)。

枯草芽孢桿菌作為一種非致病性革蘭氏陽(yáng)性菌，已成為研究生物被膜形成的模式生物。枯草芽孢桿菌具有復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，可以響應(yīng)不斷變化的環(huán)境條件來(lái)協(xié)調(diào)生物被膜基質(zhì)相關(guān)基因的表達(dá)。研究顯示枯草芽孢桿菌生物膜形成能力越強(qiáng)，防治植物病害效果越顯著。因此，研究生物膜的形成能力及形成條件將有助于今后生防細(xì)菌的遺傳改良研究及合理使用。

解淀粉芽孢桿菌是一種革蘭氏陽(yáng)性菌，與枯草芽孢桿菌親緣性高，廣泛分布于自然環(huán)境中。由于具有廣譜的抑制真菌和細(xì)菌的活性，穩(wěn)定性高，抗逆性強(qiáng)，且生長(zhǎng)速度快，解淀粉芽孢桿菌被認(rèn)為是一種非常理想的生防菌資源。解淀粉芽孢桿菌B4在靜置條件下可以形成極為明顯的生物被膜，且在分子功能一級(jí)類別中，有308個(gè)基因被注釋到metal ionbinding，因此，在現(xiàn)有的生防能力的基礎(chǔ)上，通過外源添加無(wú)害金屬子提高其生物被膜的形成，從而實(shí)現(xiàn)抑制腐敗病原菌能力的提升，為采后果實(shí)病害生物防治提供一種新的思路。

1.Costerton J W,Stewart P S,Greenberg E P.Bacterial biofilms:a commoncause of persistent infections[J].Science,1999,284(5418):1318-1322.

2.陳云.枯草芽孢桿菌生物膜在青枯病生防中的功能研究及Cyclic-di-GMP信號(hào)通路初探[D].南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種通過外源添加金屬離子提高生防細(xì)菌抑制腐敗菌的能力及在果實(shí)貯藏中的應(yīng)用方法。該方法在外源無(wú)害的前提下，通過向菌懸液中加入金屬鐵離子，增強(qiáng)了芽孢桿菌生物被膜的形成，提高了芽孢桿菌在培養(yǎng)平板及果實(shí)中抑制病原菌的能力，降低了采后果實(shí)發(fā)病率，為增強(qiáng)菌株生防效用新方法奠定基礎(chǔ)。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明首先提供了一種用于抑制采后果實(shí)腐敗病原菌的含鐵離子菌懸液的制備方法，其包括如下步驟：

(1)將解淀粉芽孢桿菌B4(Bacillus amyloliquefaciens B4)菌株在平板培養(yǎng)基上活化，選取單菌落接種至含有LB液體培養(yǎng)基的試管中，37℃，180-220rpm培養(yǎng)12-16h，得到解淀粉芽孢桿菌種子培養(yǎng)液；

所述解淀粉芽孢桿菌B4(Bacillus amyloliquefaciens B4)保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為CGMCC No:13466，保藏日期為2016年12月19日，該菌株記載在申請(qǐng)人早先申請(qǐng)的中國(guó)專利申請(qǐng)CN201710100745.9中；