[發明專利]一種枯草芽孢桿菌菌劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110782116.5
• 申請日: 2021-07-12
• 公開（公告）號: CN113234646B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 易虹
• 申請（專利權）人: 北京新正和農業科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/22;A01P1/00;A01P3/00;C12R1/125
• 代理公司: 北京國謙專利代理事務所(普通合伙) 11752
• 代理人: 肖應國

本發明公開了一種枯草芽孢桿菌菌劑及其制備方法和應用，該菌劑由枯草芽孢桿菌菌種活化、液體發酵培養、陶瓷膜過濾、噴霧干燥后獲得，可用于防治各種農作物的真菌和細菌病菌侵染，該制備方法簡單，具有發酵周期短、放罐活孢子數高、陶瓷膜過濾收率高和防治效果好、穩定性強的優點。

技術領域

本申請涉及微生物生物學技術領域，具體而言，涉及一種枯草芽孢桿菌菌劑及其制備方法和應用。

背景技術

真菌、細菌性病害是危害農作物生長的兩類大病害，一直嚴重危害著農業生產；目前，常用的防治真、細菌性病害的藥劑主要是化學農藥。化學藥劑通常存在對有些病害防治效果一般，對生態環境及農產品質量安全影響很大。

現有枯草芽孢桿菌制劑多為單一作用功能，要么只能防治真菌性病害，要么只能防治細菌性病害，且現有菌劑活性衰減率≥60%，遺傳變異率≥70%，抗環境干擾性弱工業化產出1500左右（億芽孢/克），防治率≤60%。雖然現有技術中也有一些聲稱能夠同時防治真菌和細菌病害的枯草芽孢桿菌菌劑，但是這些菌劑的制備均為高溫及長周期發酵，菌株防效范圍窄、防治率不高，且高溫與長周期發酵工藝耗能不經濟。例如CN102146352A（一種枯草芽孢桿菌及其應用）發酵周期過長，48~72小時，且耗能大；該菌劑也僅僅在楊木變色病中的應用。CN103146617A（一株枯草芽孢桿菌及其培養方法與應用）采取高溫35~38℃培養，長周期發酵48~72小時的耗能較大；僅對黃瓜、西瓜黃萎病（真菌性病害）有防治作用。CN104232514A（一種枯草芽孢桿菌及其應用）和CN104263673A（一種枯草芽孢桿菌B51及其應用）采取高溫28~35℃，48~72小時的長周期發酵，應用劑型為發酵液（雜質多，此劑型極不穩定，難以形成規模化應用），僅對草莓根腐病、灰霉病及小麥赤霉病有一定的防效。CN111778173A（枯草芽孢桿菌Pro1A2、其菌劑和制備方法及在甜瓜栽培中的應用）采取28~35℃，二級發酵，第一級：12~16小時；第二級：36~48小時，應用劑型為發酵液（雜質多，此劑型極不穩定，難以形成規模化應用）。CN201810195833.6（枯草芽孢桿菌菌株及其應用）雖能防真細菌病害，但其發酵生產工藝依然傳統，整個發酵周期長達40小時，造成防效率不高。目前，還沒有一株在真、細菌混發引起的病害上取得成果的高效雙防微生物菌劑產品。至今依然缺乏高效、廣譜、低毒、低殘留的以防治真、細菌性病害為主的微生物生物菌劑。

現有制備枯草芽孢桿菌的方法通常采用液體兩級發酵，取得發酵液，經預處理后再使用板框或碟式離心機濃縮，然后進行噴霧干燥得到原粉；發酵液經過板框或碟式離心機分離，固液分離，分離速度快但是收率低。另外，采用多級發酵還會造成菌株變異（突變）快、早衰、雜菌率高等問題，使得制備的菌劑產品穩定性差，使用效果不穩定。

發明內容

本發明提供一種枯草芽孢桿菌菌劑的制備方法，該制備方法包括如下步驟：

（1）枯草芽孢桿菌菌種活化，得種子液；

（2）種子液加入液體發酵培養基中進行液體發酵培養，得發酵液；

（3）發酵液用陶瓷膜過濾，得濃縮液；

（4）濃縮液經噴霧干燥，得菌劑原粉。

具體的，步驟（1）中的菌種活化包括在固體培養基上進行二次傳代培養（國內目前生產使用的均在第五代以上），確定生產用菌株，在固體培養基上擴繁。

步驟（2）中的液體發酵培養包括以30%的接種量（大種量）將種子液接種于液體發酵培養基中，在pH值6.8-8.5條件下培養30小時，低碳且經濟。當pH值異常升高時，在確定未染菌的情況下，補充適量10%葡萄糖，同時降低空氣流量，至到pH值恢復正常。

液體發酵培養基配方如下：淀粉2.46%；葡萄糖0.89%；冷榨黃豆餅粉（細度≥60目）2.15%；熱榨花生餅粉（細度≥60目）2.15%；蛋白胨0.11%；魚粉0.15%；硝酸鉀0.11%；酵母粉0.16%；碳酸鈣0.16%；硫酸銨0.16%；消泡劑0.05%，余量為水。