[發明專利]一種組合物及規模化生產成纖維細胞生長因子的方法

有效

• 申請號: 202110779452.4
• 申請日: 2021-07-09
• 公開（公告）號: CN113354745B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 李校堃;蘇志堅;林麗;李世軍;馮治國
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學;蘇志堅
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/50;C12N15/62;C12N15/70
• 代理公司: 北京聿華聯合知識產權代理有限公司 11611
• 代理人: 賈艷華

1.一種組合物，其包括三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽和硫酸鋅，所述三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽和所述硫酸鋅的質量比是1:（1至50）。

2.一種獲得含有成纖維細胞生長因子的融合蛋白或其中的所述成纖維細胞生長因子的方法，所述融合蛋白包括從N端到C端的可視化報告蛋白、小泛素樣修飾因子和成纖維細胞生長因子，所述方法包括如下步驟：

1-1）將所述融合蛋白的表達盒或編碼所述融合蛋白的核酸連接到第一表達載體上，得到第一重組表達載體；其中，所述第一表達載體為異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導型的表達載體；

2-1）將用于表達小泛素樣修飾因子蛋白酶的表達盒或編碼小泛素樣修飾因子蛋白酶的核酸連接到所述第一重組表達載體上，得到第二重組表達載體；

3-1）將所述第二重組表達載體轉化至第一宿主中，得到第一重組生物體；

4-1）在第一培養液中培養所述第一重組生物體至表達有所述融合蛋白和所述小泛素樣修飾因子蛋白酶，得到第一培養物；

其中，在培養溫度降至10至15°C時，在所述第一培養液中加入如權利要求1所述的組合物；

5-1）純化所述第一培養物從而得到所述成纖維細胞生長因子；

或者

1-2）同1-1）；

2-2）將所述用于表達小泛素樣修飾因子蛋白酶的表達盒或編碼小泛素樣修飾因子蛋白酶的核酸連接到第二表達載體上，得到第三重組表達載體；

3-2）將所述第一重組表達載體轉化至第二宿主中，得到第二重組生物體；將所述第三重組表達載體轉化至第三宿主中，得到第三重組生物體；

4-2）在第二培養液培養所述第二重組生物體至表達有所述融合蛋白，得到第二培養物；在第三培養液培養所述第三重組生物體至表達有所述小泛素樣修飾因子蛋白酶，得到第三培養物；將所述第二培養物與所述第三培養物混合，得到第四培養物；

其中，在所述第二培養液中加入如權利要求1所述的組合物；

5-2）純化所述第四培養物，從而得到所述成纖維細胞生長因子。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述成纖維細胞生長因子為人源成纖維細胞生長因子-1、人源成纖維細胞生長因子-2、人源成纖維細胞生長因子-3、人源成纖維細胞生長因子-4、人源成纖維細胞生長因子-5、人源成纖維細胞生長因子-6、人源成纖維細胞生長因子-7、人源成纖維細胞生長因子-8、人源成纖維細胞生長因子-9、人源成纖維細胞生長因子-10、人源成纖維細胞生長因子-11、人源成纖維細胞生長因子-12、人源成纖維細胞生長因子-13、人源成纖維細胞生長因子-14、人源成纖維細胞生長因子-16、人源成纖維細胞生長因子-17、人源成纖維細胞生長因子-18、人源成纖維細胞生長因子-19、人源成纖維細胞生長因子-20、人源成纖維細胞生長因子-21、人源成纖維細胞生長因子-22、人源成纖維細胞生長因子-23中的一種。