[發(fā)明專利]一種來源于真菌的環(huán)狀擬肽及其制備方法和應用

有效

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• 申請日: 2021-07-09
• 公開（公告）號: CN113583098B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發(fā)明（設計）人: 沈秉正;姚朝輝;孟蘭霞;王娜;胡振夏;熊遠果;張璐;劉盈;沈瑤;陳坤林
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C07K14/37
• 分類號: C07K14/37;C07K1/10;A61K38/12;A61P29/00
• 代理公司: 武漢智權專利代理事務所(特殊普通合伙) 42225
• 代理人: 張凱

本發(fā)明公開了一種來源于真菌的環(huán)狀擬肽及其制備方法和應用，該環(huán)狀擬肽的模板分子為條件致病真菌多肽中的一段，制備時使天然氨基酸和反應基團被保護的含巰基的氨基酸逐步偶聯(lián)，形成環(huán)狀擬肽的線性擬肽中間體；然后使線性擬肽中間體分子內(nèi)巰基共價偶聯(lián)，形成二硫鍵，進而形成環(huán)狀擬肽。該環(huán)狀擬肽在濃度高達1mg/mL時，其溶血率未超過5％，具有較好的安全性；葡聚糖硫酸鈉誘導的炎癥性腸病模型小鼠經(jīng)過該環(huán)狀擬肽治療后，體重降低程度顯著改善、疾病活動指數(shù)顯著降低、結(jié)腸萎縮顯著緩解，且結(jié)腸勻漿液中細胞因子IL?1β和TNF?α水平顯著降低。該環(huán)狀擬肽制備工藝簡單、易于純化，毒性低、藥理活性明確、動物水平治療效果明顯。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，涉及一種來源于真菌的環(huán)狀擬肽及其制備方法和應用。

背景技術

炎癥性腸病(Inflammatory Bowel Disease,IBD)是一類以非特異性腸道炎癥為特征的慢性免疫性疾病，現(xiàn)已成為全世界第二大常見的慢性炎性疾病，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)和克羅恩病(Crohn’s disease，CD)，具有反復發(fā)作、遷延不愈的特點，臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、粘液血便等消化系統(tǒng)癥狀以及乏力、體重減輕、貧血等全身癥狀。該病原好發(fā)于北美、歐洲等經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)，但近二十余年來隨著我國經(jīng)濟高速發(fā)展、工業(yè)化水平不斷提高，環(huán)境污染以及飲食結(jié)構的變化，使得該病在我國呈逐年上升趨勢，已經(jīng)成為消化系統(tǒng)的常見疾病。有關研究表明，我國炎癥性腸病的發(fā)病率位于亞洲第一，約為13.2/10萬(潰瘍性結(jié)腸炎約11.6/10萬；克羅恩病約1.6/10萬)。我國炎癥性腸病具有性別差異，其中男性發(fā)病率高于女性。潰瘍性結(jié)腸炎病變部位可位于中直腸、左半結(jié)腸、全結(jié)腸；而克羅恩病的病變部位大多位于結(jié)腸，以炎癥、狹窄型為主，穿透型較為少見。流行病學的調(diào)查研究結(jié)果表明，潰瘍性結(jié)腸炎病與克羅恩病的臨床表現(xiàn)的發(fā)病率約為14.0％及22.3％，其中9.6％左右的潰瘍性結(jié)腸炎患者和68.2％的克羅恩病患者存在并發(fā)癥。西方國家炎癥性腸病約為3％～5％，我國則相對較低約為0.4％；我國潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病患者的死亡率各為0.6％和1.4％。(參考文獻：王玉芳,歐陽欽,胡仁偉,等.炎癥性腸病流行病學研究進展[J].胃腸病學,2013,18(1):48-51.)

當前，炎癥性腸病的致病機制尚未完全明確，目前認為該疾病與自然環(huán)境、感染、免疫紊亂、腸道菌群平衡的喪失以及遺傳易感等多因素有關。①環(huán)境因素：有關研究表明，吸煙、高脂肪高膽固醇飲食、維生素D缺乏等與炎癥性腸病的發(fā)生相關；飲食上，高脂肪、高多不飽和脂肪酸(PUFA)、大量肉類攝入均與炎癥性腸病的患病風險的增加有關；②免疫因素：免疫異常是公認的炎癥性腸病的發(fā)病機制，腸黏膜的屏障功能為腸道免疫系統(tǒng)的重要部分，相關研究表明患者腸黏膜受損，可能會引起細胞因子、趨化因子的分泌異常、腸黏膜通透性改變、萎縮及腸道菌群的改變；③腸道微生物：炎癥性腸病的發(fā)生與腸道菌群的多樣性呈負相關；相關研究發(fā)現(xiàn)，炎癥性腸病患者中變形桿菌、白假絲酵母菌、放線菌明顯增多，而釀酒酵母、擬桿菌、厚壁菌數(shù)量明顯減少；腸道寄生蟲能夠促進轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)和白細胞介素-10(IL-10)的分泌，調(diào)控由Th1細胞介導的免疫發(fā)育，進而負向調(diào)節(jié)免疫反應；④遺傳因素：據(jù)文獻報道，炎癥性腸病發(fā)生與NOD2基因、ATG16L1基因以及TLRs基因相關。具體而言，NOD2基因的突變可能導致炎癥性腸病患者自噬功能的缺陷，ATG16L1基因的突變可能導致潘氏細胞過大量分泌抗微生物肽而引起免疫失衡，TLRs基因所編碼的TLRs蛋白為重要的模式識別受體，該受體的失調(diào)能導致炎癥性腸病的持續(xù)遷延不愈。

隨著醫(yī)療水平的不斷進步，治療炎癥性腸病的水平也不斷提高，目前臨床治療該疾病的方式主要有：手術治療和藥物治療。據(jù)統(tǒng)計，潰瘍性結(jié)腸炎患者的手術率為17.9％，克羅恩病患者發(fā)病5年之后的手術率為52.0％，再次手術率為33.9％。因此，藥物治療仍然是主要的措施，臨床用于治療炎癥性腸病代表藥物見表1。

表1目前臨床治療炎癥性腸病的代表藥物