[發(fā)明專利]鑒定楊梅果實顏色性狀的SNP分子標(biāo)記引物及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110778764.3
• 申請日: 2021-07-09
• 公開（公告）號: CN113293227B
• 公開（公告）日: 2022-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 焦云;房聰玲;柴春燕;高中山;汪國云;賈慧敏;舒巧云;周超超
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 江蘇斐多律師事務(wù)所 32332
• 代理人: 張佳妮

1.一組鑒定楊梅果實顏色性狀的SNP分子標(biāo)記引物，其特征在于所述引物包括C2-2021-51-F和C2-2021-51-R，具體序列為：

C2-2021-51-F：5’-CTTATGTTTCAGGTTTTGTGGCTTA-3’，

C2-2021-51-R：5’-AGTACTGTAAGAGTGGCAAAAATG-3’。

2.權(quán)利要求1所述的SNP分子標(biāo)記引物在鑒定楊梅果實顏色性狀中的應(yīng)用。

3.權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其步驟包括：

(1)引物合成：合成權(quán)利要求1所述的引物C2-2021-51-F和C2-2021-51-R；

(2)DNA的提取：提取楊梅葉片的基因組DNA；

(3)PCR擴增：基于上述楊梅葉片基因組DNA，使用步驟(1)合成的引物C2-2021-51-F和C2-2021-51-R進(jìn)行PCR擴增，預(yù)先加入兩個已確定果實顏色為白色的樣本DNA作為內(nèi)參；

(4)擴增產(chǎn)物檢測與分析：對PCR產(chǎn)物進(jìn)行基因型檢測分析，若有PCR擴增產(chǎn)物出現(xiàn)且與內(nèi)參樣本聚集為一組者即可視為同一果實顏色類型，若沒有任何PCR擴增產(chǎn)物出現(xiàn)者視為其他顏色類型，從而確定楊梅果實顏色性狀。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：步驟(3)中PCR擴增反應(yīng)體系為：20ng/μL的樣品基因組DNA模板2.0μL，2×SG Fast qPCR Master Mix 5μL，10μM的C2-2021-51-F 0.5μL，10μM的C2-2021-51-R 0.5μL，ddH₂O補足至10μL即可；PCR擴增為兩步法程序，即95℃3min，然后95℃3s，60℃30s進(jìn)行20個循環(huán)。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：步驟(4)中采用ABI Q6 Flex實時熒光定量PCR系統(tǒng)平臺Genotyping功能模塊自動分析結(jié)果。