[發(fā)明專利]蜜蜂冷凍精子凈化液、凈化方法和蜜蜂精子冷凍解凍方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110771596.5 | 申請日： | 2021-07-08 |
| 公開（公告）號： | CN113273569B | 公開（公告）日： | 2022-07-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李志勇;莊明亮;李劍飛;葛蓬 | 申請（專利權(quán)）人： | 吉林省養(yǎng)蜂科學(xué)研究所（吉林省蜂產(chǎn)品質(zhì)量管理監(jiān)督站;吉林省蜜蜂遺傳資源基因保護中心） |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02;C12N5/076 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 黃燕 |
| 地址： | 132000 吉*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 蜜蜂 冷凍 精子 凈化 方法 解凍 | ||
本發(fā)明公開了一種蜜蜂冷凍精子凈化液、凈化方法和蜜蜂精子冷凍解凍方法，涉及蜜蜂精子冷凍保存技術(shù)領(lǐng)域。該蜜蜂冷凍精子凈化液的組分按重量百分數(shù)計包括：青霉素鈉鹽0.01?0.02％、硫酸鏈霉素0.02?0.03％、滲透壓調(diào)節(jié)劑2.23?3.35％、糖1?2％和4?羥乙基哌嗪乙磺酸0.4?0.6％以及余量的水。該蜜蜂冷凍精子凈化液可以將解凍后的蜜蜂精子中二甲基亞砜等有毒有害成分快速洗脫出來，起到凈化蜜蜂精子和保護授精蜂王的作用，提高授精蜂王的存活率和產(chǎn)受精卵比例。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及蜜蜂精子冷凍保存技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及蜜蜂冷凍精子凈化液、凈化方法和蜜蜂精子冷凍解凍方法。
背景技術(shù)
蜜蜂種質(zhì)資源保護通常采用群體水平上的活體保種技術(shù)和蜜蜂精子冷凍保存技術(shù)。蜜蜂精子冷凍保存從1803年問世以來，已經(jīng)在許多哺乳動物研究上取得成功，1964年Sawada和Chang首次利用7％甘油作為冷凍保護劑成功的將蜜蜂精液保存，拉開了蜜蜂蜜蜂精子冷凍保存的序幕。蜜蜂蜜蜂精子冷凍技術(shù)能夠?qū)?yōu)質(zhì)蜂種的精子低溫下長時間冷凍保存，最大程度減少外界因素影響，提高蜜蜂種質(zhì)資源保護的可靠性。蜜蜂蜜蜂精子冷凍技術(shù)的出現(xiàn)，豐富了蜜蜂基因庫的保種技術(shù)手段，為珍惜蜜蜂種質(zhì)資源保護提供技術(shù)支撐，為蜜蜂遺傳育種以及蜜蜂生物學(xué)科發(fā)展做出貢獻。
蜜蜂蜜蜂精子冷凍保存技術(shù)發(fā)展迄今幾十年，雖然取得了很大成功，但是利用蜜蜂蜜蜂冷凍精子為蜂王授精，效果仍然不理想。
鑒于此，特提出本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種蜜蜂冷凍精子凈化液，其能夠起到凈化蜜蜂冷凍精子，提高授精體的存活率和產(chǎn)授精卵比例。
本發(fā)明的目的在于提供一種蜜蜂冷凍精子凈化方法，其通過對蜜蜂冷凍精子進行凈化，能夠提高授精體的存活率和產(chǎn)授精卵比例。
本發(fā)明的目的在于提供一種蜜蜂精子冷凍解凍方法。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：
第一方面，本發(fā)明提供一種蜜蜂冷凍精子凈化液，其組分按重量百分數(shù)計包括：青霉素鈉鹽0.01-0.02％、硫酸鏈霉素0.02-0.03％、滲透壓調(diào)節(jié)劑2.23-3.35％、糖1-2％和4-羥乙基哌嗪乙磺酸0.4-0.6％以及余量的水。
在可選的實施方式中，所述滲透壓調(diào)節(jié)劑包括檸檬酸鈉、碳酸氫鈉和氯化鉀中的至少一種；
優(yōu)選地，所述檸檬酸鈉、所述碳酸氫鈉和所述氯化鉀的質(zhì)量比為2-3：0.2-0.3：0.03-0.05。
在可選的實施方式中，所述糖包括海藻糖、蔗糖、葡萄糖和果糖中的至少一種；
優(yōu)選地，所述糖為海藻糖。
在可選的實施方式中，其組分按重量百分數(shù)計包括：青霉素鈉鹽0.01-0.02％、硫酸鏈霉素0.02-0.03％、檸檬酸鈉2.40-2.48％、碳酸氫鈉0.20-0.25％、氯化鉀0.03-0.04％、海藻糖1.10-1.20％和4-羥乙基哌嗪乙磺酸0.45-0.55％以及余量的水。
第二方面，本發(fā)明提供一種蜜蜂冷凍精子凈化方法，其包括將解凍后的精子離心并去除上清液，隨后向剩余物中加入如前述實施方式任一項所述的蜜蜂冷凍精子凈化液，攪拌混合，對混合物進行離心去除上清液，得到可用于人工授精的凈化精子。
在可選的實施方式中，所述剩余物與所述蜜蜂冷凍精子凈化液的體積比為1：8-12。
在可選的實施方式中，所述離心時的離心力為700-900g，離心時間為2-3min。
在可選的實施方式中，在對所述混合物進行離心之前先將所述混合物進行靜置8-12min。
第三方面，本發(fā)明提供一種蜜蜂精子冷凍解凍方法，其包括如前述實施方式任一項所述的蜜蜂冷凍精子凈化方法。
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