[發明專利]基于PMA染色結合熒光定量PCR法快速檢測黃瓜棒孢葉斑病菌的方法及應用

在審

• 申請號: 202110768315.0
• 申請日: 2021-07-07
• 公開（公告）號: CN113337634A
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 謝學文;李寶聚;陳利達;柴阿麗;李磊;石延霞;范騰飛
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蔬菜花卉研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.檢測或輔助檢測多主棒孢菌的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

A1)、使用疊氮溴化丙錠處理待測樣品；

A2)、提取A1)處理完畢的樣品的基因組DNA；

A3)、以A2)所得的基因組DNA作為模板，以SEQ ID No.1所示的單鏈DNA和SEQ ID No.2所示的單鏈DNA作為引物進行實時熒光定量PCR，根據擴增曲線確定所述待測樣品是否感染多主棒孢菌和/或確定所述待測樣品中多主棒孢菌的含量和/或所述待測樣品是否為多主棒孢菌。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，A1)所述待測樣品為真菌、植物器官、植物組織、或土壤。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，A1)所述疊氮溴化丙錠處理待測樣品為使所述待測樣品與疊氮溴化丙錠溶液混合得到混合液，激活所述混合液中的疊氮溴化丙錠；所述疊氮溴化丙錠溶液中疊氮溴化丙錠的含量為80μmol·L^-1以上。

4.如權利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于，激活所述混合液中的疊氮溴化丙錠包括將所述混合液置于黑暗中反應10分鐘后，再光照處理10分鐘以上。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于，所述根據擴增曲線確定所述待測樣品是否感染多主棒孢菌和/或確定所述待測樣品是否為多主棒孢菌的方法為：如果擴增曲線為非S型擴增曲線，確定待測樣品中沒有感染多主棒孢菌或疑似沒有感染多主棒孢菌，和/或確定所述待測樣品不是多主棒孢菌或候選不是多主棒孢菌；如果擴增曲線為S型擴增曲線，確定待測樣品感染多主棒孢菌或疑似感染多主棒孢菌，和/或確定所述待測樣品為多主棒孢菌或候選為多主棒孢菌。

6.檢測或輔助檢測多主棒孢菌的引物組合物，其特征在于：所述引物組合物是特異擴增多主棒孢菌琥珀酸脫氫酶B亞基基因的引物對，所述引物組合物由核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.1的單鏈DNA和核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.2的單鏈DNA組成。

7.檢測或輔助檢測多主棒孢菌的試劑或試劑盒，其特征在于，所述試劑或試劑盒含有權利要求6所述的引物組合物和疊氮溴化丙錠。

8.權利要求6所述的引物組合物在檢測或輔助檢測多主棒孢菌中的應用，或在黃瓜棒孢葉斑病的檢測、預防和/或防治中的應用。

9.權利要求7所述的試劑或試劑盒在檢測或輔助檢測多主棒孢菌中的應用，或在黃瓜棒孢葉斑病的檢測、預防和/或防治中的應用。

10.權利要求1-5中任一所述的方法在檢測或輔助檢測多主棒孢菌中的應用，或在黃瓜棒孢葉斑病的檢測、預防和/或防治中的應用。