[發明專利]一種重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白及其單克隆抗體

在審

• 申請號: 202110765563.X
• 申請日: 2021-07-07
• 公開（公告）號: CN113403320A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 楊麗超;何敏;李輝;溫莎
• 申請（專利權）人: 廣西醫科大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07K14/47;C12N1/21;C12N15/70;C12N5/20;C07K16/18;C12R1/19
• 代理公司: 北京東方盛凡知識產權代理事務所(普通合伙) 11562
• 代理人: 程小芳

本發明公開了一種重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白及其單克隆抗體，屬于生物技術領域，本發明利用大腸桿菌表達與純化重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白，提供了重組人VASN蛋白LRR結構域表達載體，并對所誘導表達出的重組人VASN蛋白LRR結構域進行過Ni瓊脂糖凝膠層析柱純化及鑒定，以重組VASN蛋白LRR結構域蛋白作為免疫原對小鼠進行免疫，利用細胞融合技術制備出針對VASN蛋白LRR結構域的雜交瘤細胞株，以及該雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體。本發明的單克隆抗體能夠高特異性地結合VASN抗原，具有很高的特異性。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白及其單克隆抗體。

背景技術

人Vasorin(VASN)，又稱SLIT-like2，在VASN的機制研究發現其主要通過下調TGF-β參與損傷血管的應答反應，最終影響血管壁的形成。通過結合TGF-β，減弱TGF-β的信號傳導，吸引血管內皮細胞的遷移和誘導其形成血管樣結構，并抑制白細胞的遷移。TGF-β與腫瘤發生、發展密切相關，在調節腫瘤細胞的增殖和分化、抑制機體免疫功能、增加血管生成、誘導細胞外基質的產生而促進腫瘤的侵襲和轉移中均具有重要作用。而在腫瘤的發展過程中，腫瘤誘導的新生血管形成、腫瘤細胞和內皮細胞之間的“通訊”一直被認為是最重要的。由此可見，VASN與腫瘤的關系十分密切。但至今尚缺乏針對VASN的具有高特異性的抗體。

發明內容

本發明的目的是提供一種重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白及其單克隆抗體，以解決上述現有技術存在的問題，該單克隆抗體具有可以高特異性的結合人體中存在的VASN抗原。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示。

本發明還提供一種重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本發明還提供一種重組載體，包含上述的重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白的基因，所述重組載體為pET30a(+)載體。

本發明還提供一種重組工程菌株，包括上述的重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白的基因或上述的重組載體。

進一步地，所述重組工作菌株為大腸桿菌BL21(DE3)。

本發明還提供一種上述的重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白的基因、上述的重組載體或上述的重組工程菌株在表達重組人VASN蛋白LRR結構域蛋白中的用途。

本發明還提供一種VASN雜交瘤細胞株的制備方法，包括以下步驟：

a.采用上述的VASN蛋白LRR結構域蛋白免疫動物；

b.將所述動物的脾細胞或淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合；

c.篩選得到VASN雜交瘤細胞株。

進一步地，所述動物為小鼠，所述VASN蛋白LRR結構域蛋白與佐劑混合后，以皮下注射方式免疫動物，所述VASN蛋白LRR結構域蛋白與佐劑的體積比為1:1。

本發明還提供一種上述的制備方法制備得到的VASN雜交瘤細胞株。

本發明還提供一種由上述的VASN雜交瘤細胞株分泌的VASN單克隆抗體。

本發明公開了以下技術效果：

目的蛋白表達純化方法簡易，成本低，經過Ni瓊脂糖凝膠層析柱純化，最終可以得到高產率、高純度的重組蛋白。