[發明專利]一種泡桐的組織培養方法

在審

• 申請號: 202110765532.4
• 申請日: 2021-07-07
• 公開（公告）號: CN113349055A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發明（設計）人: 崔小麗;李強;尤小婷;郭建章;黃麗純;江宇健;藍必政;張立;彭喜進;陳寧;黎宗浩
• 申請（專利權）人: 廣東粵恬生物科技有限公司;廣東省湛江農墾科學研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 劉瑤云;陳偉斌

1.一種泡桐的組織培養方法，其特征在于：所述該泡桐的組織培養方法所需要的原料有泡桐植株、洗潔精或飽和洗衣服溶液、75%的酒精溶液、多菌靈和培養基。

2.根據權利要求1所述的一種泡桐的組織培養方法，其特征在于：所述泡桐的組織培養方法如下：

S1:外植體的選擇

泡桐無菌建立材料可以用枝條的節段和頂芽作為外植體，本方法中選擇生長良好的當年生半木質化的泡桐枝條上部，前一天對選擇的枝條噴施多菌靈溶液，多菌靈采用噴灌的方式配成1:1000的溶液噴灑在枝條表面，將剪下的枝條除去葉片，切出帶腋芽的莖段和頂芽；

S2:外植體的處理

將前期選擇好的帶腋芽莖段和頂芽作為外植體，用洗潔精或者飽和洗衣服溶液洗凈，用刷子刷去外植體表面不易除去的污漬，使用流動的自來水沖洗20min，然后將洗凈后的外植體放在超凈臺上，使用75%的酒精溶液浸泡30s，浸泡完成后使用無菌水沖洗3~4次，再將其浸入0.1%升汞溶液11min~18min，再使用無菌水沖洗3~5次，最終取出瀝干水分，切出帶有芽點的呈0.5cm見方的小莖段；

S3:初代培養

將上述經過處理后的泡桐帶腋芽莖段或頂芽外植體放入配方為MS+6-BA2~4.00mg/L+IBA0.01~0.05mg/L+糖30g/L+卡拉膠6g/L的芽誘導培養基中，使其經過一段時間分化出芽，再此過程中培養基處于恒溫25℃~28℃之間，光照在500~800lx之間，持續光照10~12h/d，接種后5~6天開始出芽，經過15~20天左右誘導出的芽即可進行轉接；

S4:增殖培養

上述初代培養得到的可供使用的芽數量不充足，需要對初代培養出來的芽苗進行進一步的增殖培養，將上述初代培養得到的高為2~3cm的小芽接種到配方為1/2MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.01mg/L+糖30g/L+卡拉膠6g/L的芽增殖培養基中進行芽增殖，培養溫度為25~28℃，光照強度在1500~2000lx之間，光照時間為10~12h/d，經過10~15天后得到增殖芽，在增殖芽生長到和原先差不多的2~3cm時，繼續將增殖芽放入相同配方為1/2MS+6-BA3.0mg/L+IBA0.01mg/L+糖30g/L+卡拉膠6g/L的芽增殖培養基中進行增殖，經過5~6次的連續增殖得到數量充足的增殖芽，即可進行下一步培養操作；

S5:生根培養

將在增殖培養中生長到4~5cm的泡桐增殖芽基部膨大的部分切除，選取泡桐上部生長良好的部分接種到配方為1/2MS+IBA1.0~1.5mg/L+NAA0.5~1.0mg/L蔗糖15~20g/L+卡拉膠5g/L的生根培養基中進行生根培養，在此期間培養基恒溫25~28℃，光照強度在500~800lx，光照時間為10~12h/d，經過7~10天的培養接種的部分即可生根，其中前期被切下的基部膨大部分可以重新放入增殖培養基中，使其繼續分化出苗，從而提高植物的利用率。