[發明專利]一種利用基因編輯構建法夫酵母的方法在審
| 申請號： | 202110764526.7 | 申請日： | 2021-07-06 |
| 公開（公告）號： | CN113652444A | 公開（公告）日： | 2021-11-16 |
| 發明（設計）人： | 李志朋;楊昊翌;倪輝;李利君;陳哲昊;吳曉琪;朱艷冰;姜澤東;李清彪 | 申請（專利權）人： | 集美大學 |
| 主分類號： | C12N15/81 | 分類號： | C12N15/81;C12N15/61;C12R1/645 |
| 代理公司： | 廈門創象知識產權代理有限公司 35232 | 代理人： | 王鳳玲;尤懷成 |
| 地址： | 361000 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 基因 編輯 構建 酵母 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種利用基因編輯構建法夫酵母的方法，其特征在于，包括：
(1)以法夫酵母的基因組為DNA模板，以crtYB為目的基因，設計相對應的sgRNA，使用sgRNA體外轉錄試劑盒對sgRNA進行PCR擴增；
(2)將步驟(1)擴增后的sgRNA與Cas9組合形成核糖核蛋白，核糖核蛋白再導入質粒中；
(3)將步驟(2)獲得的質粒電轉化法夫酵母，用抗性平板篩選，并經PCR基因序列驗證，得到利用基因編輯構建的法夫酵母。
2.如權利要求1所述的利用基因編輯構建法夫酵母的方法，其特征在于，步驟(1)中，crtYB基因的序列如SEQ ID NO：1所示。
3.如權利要求1所述的利用基因編輯構建法夫酵母的方法，其特征在于，步驟(1)中，sgRNA進行PCR擴增使用的引物為：正向引物：5’-ATAGGAGAATGGGATGTGGA-3’；反向引物：5’-AAGAGTTGTATTCCAGAAAGGGAA-3’。
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