[發明專利]新冠病毒重組蛋白和人血管緊張素轉換酶-2重組蛋白及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110762069.8
• 申請日: 2021-07-06
• 公開（公告）號: CN113563477B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 郭玉芊;楊智昉;艾丁
• 申請（專利權）人: 上海健康醫學院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N9/48;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/569
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

1.一種新冠病毒S1-NCTD重組蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.一種如權利要求1所述新冠病毒S1-NCTD重組蛋白的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)從新冠病毒S基因YP_009724390.1選取編碼S1-NCTD片段aa25-588的核苷酸序列，相對應的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示，并以此為模板，設計上游引物和下游引物，然后經過PCR擴增獲得S1-NCTD的目的基因；

2)經BamHI和NotI雙酶切后，插入到表達質粒pGEX-4T2，構建重組質粒pGEX-4T2-S1-NCTD；將重組質粒轉化至大腸桿菌Chaperone?pG-KJE8/BL21(DE3)菌株獲得重組工程菌；將重組工程菌利用IPTG誘導表達重組蛋白并通過包涵體處理獲得目的蛋白，表達產物用SDS-PAGE鑒定，最終獲得GST-S1-NCTD重組蛋白。

3.權利要求1所述新冠病毒S1-NCTD重組蛋白的應用，其特征在于，所述新冠病毒S1-NCTD重組蛋白和人血管緊張素轉換酶-2重組蛋白在制備新冠病毒中和抗體的ELISA檢測試劑盒上的應用，所述人血管緊張素轉換酶-2重組蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

4.一種新冠病毒中和抗體ELISA檢測試劑盒，其特征在于，包括包被抗原和酶標二抗，其中，以新冠病毒S1-NCTD重組蛋白作為新冠病毒包被抗原，以人血管緊張素轉換酶-2重組蛋白標記后作為酶標二抗，所述新冠病毒S1-NCTD重組蛋白氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，所述人血管緊張素轉換酶-2重組蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。