[發明專利]伴刀豆球蛋白A誘導的小鼠干眼癥模型的構建方法及應用

在審

• 申請號: 202110761485.6
• 申請日: 2021-07-06
• 公開（公告）號: CN113519461A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 江斌;袁永明
• 申請（專利權）人: 江西中洪博元生物技術有限公司
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K49/00;A61D7/00
• 代理公司: 蘇州中合知識產權代理事務所(普通合伙) 32266
• 代理人: 劉召民

本發明提供了伴刀豆球蛋白A誘導的小鼠干眼癥模型的構建方法及應用。伴刀豆球蛋白A誘導的小鼠干眼癥模型的構建方法包括：配制10mg/ml的刀豆球蛋白A PBS溶液，分裝為20μl/滴，使用時用胰島素注射針吸取一滴，注射到小鼠一側淚腺即可。使用小鼠品系為普通BALB/c小鼠，價格較低，且成模率為70％以上。本方法為單次注射方法，藥物使用率低，造模周期短；此方法誘導的干眼癥模型，符合該癥的部分臨床特征；干眼癥小鼠模型可以應用于治療干眼癥藥物的研發。

技術領域

本發明屬于動物實驗模型構建技術領域，涉及伴刀豆球蛋白A誘導的小鼠干眼癥模型的構建方法及應用。

背景技術

干眼癥，即角膜干燥癥，是一種由于某種原因引起淚液量或質異常及動力學異常，從而使淚膜不穩定，并伴有眼表炎癥，導致眼部不適甚至視力受損的疾病。目前使用的干眼癥動物模型可以分為五類，包括淚液不足型干眼癥、蒸發過強型干眼癥、黏蛋白缺乏型干眼癥、淚液動力學異常型干眼癥以及混合型干眼癥。包括使用原發性的動物模型和藥物誘導模型以及手術模型。

原發性的動物模型雖然往往最貼合臨床特征，但是這一類往往模型制備復雜，或者成模率低；手術模型一般采取淚腺摘除的方法，但是動物淚腺代償的存在使的成模率往往不高，且模型穩定性不夠；藥物誘導模型一般作為實驗室優先考慮的造模方法，包括使用東莨菪堿對淚腺造成損傷、使用雄激素受體拮抗劑等或者以擾亂瞼板腺對動物淚膜的脂質層造成損傷、或利用維生素A缺乏對動物杯狀細胞和黏蛋白表達造成影響，或利用光刺激使動物淚液動力學異常。

目前雖然使用的動物模型十分廣泛，但尚未有一種理想的模型作為研究工具。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的在于提供伴刀豆球蛋白A誘導的小鼠干眼癥模型的構建方法及應用。

為了實現上述技術目的，本發明采用的技術方案為：

本發明提供了伴刀豆球蛋白A誘導的小鼠干眼癥模型的構建方法，包括：配制10mg/ml至15mg/ml的刀豆球蛋白A PBS溶液，分裝為20±2μl/滴，使用時用胰島素注射針吸取一滴，注射到小鼠一側淚腺即可。

優選地，所述小鼠為成年BALB/c小鼠。

優選地，上述方法還包括造模后第三天進行模型驗證。

優選地，所述模型驗證的方法包括：在全身麻醉和無局部麻醉狀態下利用酚紅棉線對小鼠淚液分泌量進行檢測，酚紅棉線染色長度達5mm認為小鼠淚液分泌正常，染色長度為2mm則認為小鼠淚液分泌不足，造模成功。

優選地，所述模型驗證的方法包括：采用3％Lissamine Green B染色劑對小鼠進行滴眼，持續1min，紗布吸去多余染液，此后在顯微鏡下觀察小鼠角膜染色情況，正常小鼠眼球不著色，成模小鼠角膜染為藍色。

優選地，所述模型驗證的方法包括：使用RT-PCR對小鼠淚腺RNA進行檢測，淚腺萎縮后RNA含量將降低，體現在RT-PCR目的擴增片段CT值增加。

本發明還提供了上述構建方法的應用，所述應用包括在用于治療干眼癥的藥物研發中的應用。

優選地，所述應用包括：構建干眼癥動物模型后，根據分組對動物執行治療方案，待治療方案周期結束后，通過包括病理、生化檢測在內的相關檢測來確認治療藥物是否有效。

更優選地，所述分組包括模型組、正常對照組、陽性藥物組和陰性藥物組。

本方法在分類上為藥物誘導致淚液分泌不足類型，但相對于傳統方法，有如下優點：

一)使用小鼠品系為普通BALB/c小鼠，價格較低，且成模率為70％以上。

二)本方法為單次注射方法，相對傳統的多次長時間誘導，具有藥物使用率低，造模周期短的優點。