[發(fā)明專利]一種基于串聯(lián)表達(dá)口蹄疫病毒VLP的液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110761444.7
• 申請(qǐng)日: 2021-07-06
• 公開（公告）號(hào): CN113917137B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳平;鐘鑫濤;張婷婷;李娜;李楠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 嘉銘（固安）生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/62
• 分類號(hào): C12N15/62;G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧;曹小燕

1.一種基于串聯(lián)表達(dá)口蹄疫病毒VLP的液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括通過A-O-VLP-3Cmutant表達(dá)制備的VLP，所述A-O-VLP-3Cmutant具有如序列表中Seq IDNO.3所示的核苷酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，試劑盒中還包括抗體、酶標(biāo)抗體工作液、包被液、洗滌液、陽性血清對(duì)照、陰性對(duì)照血清、顯色液和終止液。

3.如權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述VLP由A-O-VLP-3Cmutant在表達(dá)體系中表達(dá)形成；所述表達(dá)系統(tǒng)選自大腸桿菌、酵母、昆蟲細(xì)胞、植物或者哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的任一種。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述表達(dá)體系為SF9真核表達(dá)系統(tǒng)；所述A-O-VLP-3Cmutant氨基酸序列推導(dǎo)得到的氨基酸序列如序列表Seq ID NO.7所示。

5.如權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述A-O-VLP-3Cmutant由口蹄疫病毒A型的A-P12A基因和O型的O-P12A3C-mutant基因制得；所述A-P12A、O-P12A3C-mutant具有如序列表中Seq ID NO.1、Seq ID NO.2所示的核苷酸序列。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述O-P12A3C-mutant基因是將O-P12A和O-3C-mutant進(jìn)行融合PCR而獲得，其中的O-P12A和O-3C-mutant分別具有如序列表中SeqID NO.4、Seq ID NO.5所示的核苷酸序列。

7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述的O-3C-mutant是由O-3C的第127個(gè)氨基酸由L變?yōu)镻而獲得，其中的3C具有如序列表Seq ID NO.6所示的核苷酸序列。

8.如權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的A-O-VLP-3Cmutant經(jīng)SF9真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)制備VLP，是通過pFast-A-O-VLP-3Cmutant轉(zhuǎn)入DH10bac感受態(tài)細(xì)胞，進(jìn)行重組、篩選、鑒定，得到Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant質(zhì)粒，再轉(zhuǎn)入表達(dá)體系。

9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述VLP的制備包括以下步驟：

1)制備口蹄疫病毒A型的A-P12A基因和O型的O-P12A3C-mutant基因；

2)pFast載體與A-P12A酶切連接獲得pFast-A-P12A；

3)pFast-A-P12A與O-P12A3C-mutant酶切連接獲得pFast-A-O-VLP-3Cmutant；

4)pFast-A-O-VLP-3Cmutant轉(zhuǎn)入DH10bac感受態(tài)細(xì)胞，得到Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant質(zhì)粒；

5)Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant轉(zhuǎn)入SF9真核表達(dá)系統(tǒng)，收獲重組桿狀病毒。

10.如權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，收獲的重組桿狀病毒還需擴(kuò)增，裂解，再經(jīng)過分子篩過柱純化。