[發(fā)明專利]抗豬Gasdermin D蛋白單克隆抗體、分泌該單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110756919.3
• 申請(qǐng)日: 2021-07-05
• 公開（公告）號(hào): CN113462653B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張文龍;宋佳夢(mèng);王君偉;馬波
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577;C12R1/91
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 馬鑫

本發(fā)明公開了一種抗豬Gasdermin D蛋白單克隆抗體、分泌該單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用。本發(fā)明所述的一種抗豬Gasdermin D蛋白單克隆抗體，由保藏編號(hào)為CGMCC No.22321的雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生。實(shí)驗(yàn)證明，所述的單克隆抗體對(duì)豬Gasdermin D蛋白具有反應(yīng)特異性，所述的單克隆抗體不僅能夠檢測豬GSDMD全蛋白，還能夠檢測活化切割后的豬GSDMD蛋白羧基端節(jié)段。本發(fā)明的提出對(duì)豬GSDMD生物學(xué)功能的研究具有重要意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種單克隆抗體、分泌該單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，具體涉及一種抗豬Gasdermin D蛋白單克隆抗體、產(chǎn)生該單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，本發(fā)明還涉及上述單克隆抗體用于檢測豬的組織和細(xì)胞培養(yǎng)物中豬Gasdermin D蛋白表達(dá)和切割情況檢測的方法。本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

細(xì)胞焦亡(pyroptosis)是一種重要的程序性細(xì)胞死亡(programmed cell death,PCD)形式。與細(xì)胞凋亡不同，細(xì)胞焦亡是一種具有促炎特性的PCD形式。早期的研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞焦亡發(fā)生的過程中，細(xì)胞中的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、人的caspase-4/5和小鼠的caspase-11被活化。同時(shí)，細(xì)胞焦亡發(fā)生的過程中會(huì)增加IL-1β和IL-18等主要促炎性細(xì)胞因子以及高遷移率族蛋白B1(HMGB1)等炎性介質(zhì)的釋放。Gasdermin D(GSDMD)是介導(dǎo)細(xì)胞焦亡的效應(yīng)分子之一。全長GSDMD蛋白具有氨基酸結(jié)構(gòu)域(GSDMD-N)和羧基端結(jié)構(gòu)域(GSDMD-C)兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間通過柔性結(jié)構(gòu)相連，柔性結(jié)構(gòu)中有高度保守的caspases的酶切位點(diǎn)。完整的GSDMD分子，GSDMD-N和GSDMD-C相互結(jié)合，呈現(xiàn)自抑制狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞中的caspase-1、caspase-4/5以及caspase-11被激活時(shí)，可以在GSDMD-N和GSDMD-C之間對(duì)GSDMD進(jìn)行切割。產(chǎn)生分子量30kDa左右的GSDMD-N和20kDa左右的GSDMD-C。GSDMD-N可以在細(xì)胞膜和線粒體膜上形成穿膜孔道。GSDMD-N在細(xì)胞膜上形成的穿膜孔道是IL-1β和IL-18以及IL-33等細(xì)胞因子向細(xì)胞外釋放的主要途徑。當(dāng)GSDMD-N形成的穿膜孔道對(duì)細(xì)胞膜破壞嚴(yán)重時(shí)，細(xì)胞發(fā)生焦亡性裂解，大量內(nèi)容物釋放，加劇炎癥反應(yīng)。GSDMD除了可以被caspase-1、caspase-4/5和caspase-11切割為GSDMD-N和GSDMD-C兩段外，還可以被caspase-3切割，切割產(chǎn)物為一個(gè)10kDa左右的肽段和一個(gè)43kDa左右的肽段。GSDMD被caspase-3切割產(chǎn)生的兩段多肽均不表現(xiàn)生物學(xué)功能。GSDMD被caspase-3的切割被認(rèn)為是細(xì)胞調(diào)控自身發(fā)生程序性死亡方式的重要機(jī)制之一。GSDMD的活化已被證實(shí)與多種疾病(如腫瘤、自身免疫性疾病以及傳染性疾病等)的發(fā)生有密切關(guān)聯(lián)，并且被認(rèn)為是一個(gè)新的疾病治療靶點(diǎn)。

目前，市售的GSDMD抗體均是針對(duì)人和小鼠GSDMD特異性的抗體，而缺少針對(duì)其他生物GSDMD具有特異性的抗體，這對(duì)于在其他生物中探討GSDMD功能的工作來說是不利的。特異性抗體是研究蛋白質(zhì)功能的重要工具之一，本發(fā)明旨在提供一種小鼠抗豬GSDMD蛋白單克隆抗體，以及運(yùn)用該單克隆抗體對(duì)豬源細(xì)胞和豬組織中GSDMD表達(dá)和切割情況進(jìn)行免疫印跡檢測的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種分泌抗豬GSDMD蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；

本發(fā)明的目的之二是提供由所述雜交瘤細(xì)胞株分泌產(chǎn)生的抗豬GSDMD蛋白單克隆抗體；

本發(fā)明的目的之三是提供所述單克隆抗體的用途。

為了達(dá)到以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：