[發明專利]一種微生物的檢測方法及其應用

在審

• 申請號: 202110752923.2
• 申請日: 2021-07-02
• 公開（公告）號: CN113670798A
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 溫俊林;朱宇范;劉劍波;林健弟;葉俊浩;吳嘉林;袁勇;王逸
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: G01N15/10
• 分類號: G01N15/10;G01N15/14;G01N21/78;G01N21/01
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 肖云

本發明公開了一種微生物的檢測方法及其應用，所述方法包括以下步驟：將納米金溶液、NaCl溶液與待測樣品進行顏色反應，通過檢測反應液的吸光度和色度差來檢測微生物活性或對微生物細胞進行計數。本發明方案無需任何納米金標記過程、穩定性好、成本低，操作簡單，不需要專業培訓即可完成整個檢測過程，響應速度快，整個檢測過程在10min內即可完成；且無需使用大型儀器，即可實現信號的獲取、處理、計算和結果輸出，可用于現場實時檢測微生物。

技術領域

本發明屬于生物技術和快速檢測領域，具體涉及一種微生物的檢測方法及其應用。

背景技術

細菌感染是指致病菌侵入人體引起的急性全身性感染，可導致肺炎、痢疾、結核病等嚴重疾病，對人體健康和財產安全造成了嚴重危害。致病性微生物如大腸桿菌、金黃葡萄球菌和沙門氏菌等是造成人體細菌感染重要原因。早期快速測定微生物是治療和控制細菌感染的必要前提。

目前，常用的微生物檢測方法包括平板計數法、分子生物法和熒光檢測法等。平板培養法作為“金標準”已經被廣泛用于微生物分析，該方法包括瓊脂平板的涂布、培養和菌落計數等步驟，操作十分復雜，通常需要24-72小時才能獲得檢測結果。分子生物學法利用核酸探針識別作用和聚合酶反應的信號擴增作用進行微生物的檢測，雖然具有較高的靈敏度和準確性，然而檢測過程十分復雜，需要熟練的專業人員以及實驗室環境才能完成檢測。熒光染色法通過采用有機或無機的熒光染料對微生物細胞進行熒光染色而實現對微生物檢測，對于定性分析，操作較為簡單、能快速獲取檢測結果，然而對于定量檢測則需要使用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀等昂貴的大型儀器，不適于偏遠地區和基層單位的廣泛推廣使用。因此，開發快速、簡單、經濟的微生物檢測方法具有重要意義。

目前微生物納米金檢測技術主要針對菌體細胞、胞內核酸、蛋白分子而進行，存在以下不足之處：(1)以胞內核酸和蛋白為目標分析物進行檢測時需要復雜的樣品制備過程；(2)需要使用抗體、核酸和酶等對納米金進行標記，過程繁瑣、耗時耗力；(3)納米金探針保存條件較為苛刻，容易失活、穩定性差。

發明內容

本發明旨在至少解決上述現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提出一種微生物檢測方法，能夠快速準確的檢測微生物的活性及濃度，成本低，無須使用大型儀器。

本發明還提出一種具有上述檢測方法的應用。

根據本發明的一個方面，提出了一種微生物的檢測方法，所述方法包括以下步驟：將納米金溶液、NaCl溶液與待測樣品進行顏色反應，通過檢測反應液的吸光度或色度差來檢測微生物活性或對微生物細胞進行計數。

在本發明的一些實施方式中，所述待測樣品中包括大腸桿菌、金黃葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌中的一種或多種。

在本發明的一些實施方式中，所述納米金的制備方法包括如下步驟：將氯化金溶液與檸檬酸鈉溶液進行反應，即得所述納米金。

在本發明的一些實施方式中，所述納米金的制備包括如下步驟：將氯化金溶液加熱至沸騰后迅速加入0.5～3％的檸檬酸鈉溶液，再保持沸騰20～40min，直至溶液變成酒紅色，即得納米金溶液。

在本發明的一些實施方式中，所述納米金的制備包括如下步驟：將100ml的0.01％氯化金溶液加熱至溶液沸騰后迅速加入4mL 1％的檸檬酸鈉溶液，再保持沸騰30min，直至溶液變成酒紅色。

在本發明的一些實施方式中，所述納米金溶液中納米金的粒徑為1～100nm。

在本發明的一些實施方式中，所述待測樣品與納米金溶液的體積比為1～3：1。

在本發明的一些實施方式中，所述待測樣品與納米金溶液的體積比為1：1。

在本發明的一些實施方式中，所述NaCl溶液的濃度為1～3mol/L。