[發(fā)明專利]一種抗羅非魚湖病毒的單克隆抗體及其細(xì)胞株和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110751722.0 | 申請日： | 2021-07-02 |
| 公開（公告）號： | CN113604438B | 公開（公告）日： | 2022-07-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李瑩瑩;王慶;曾偉偉;王英英;尹紀(jì)元;石存斌 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所 |
| 主分類號： | C12N5/20 | 分類號： | C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569;C12R1/91 |
| 代理公司： | 廣州嘉權(quán)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 44205 | 代理人： | 齊鍵 |
| 地址： | 510380 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 羅非魚 病毒 單克隆抗體 及其 細(xì)胞株 應(yīng)用 | ||
本發(fā)明公開了一種抗羅非魚湖病毒的單克隆抗體及其細(xì)胞株和應(yīng)用，該雜交瘤細(xì)胞株為雜交瘤細(xì)胞TiLV S10E3，于2020年11月5日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：C2020209。該雜交瘤細(xì)胞株由SP2/0骨髓瘤細(xì)胞與免疫了羅非魚湖病毒S10節(jié)段編碼蛋白的小鼠脾細(xì)胞融合得到，能夠無限增殖并持續(xù)產(chǎn)生抗羅非魚湖病毒S10節(jié)段編碼蛋白的單克隆抗體，產(chǎn)生的單克隆抗體效價高，對羅非魚湖病毒具有較好的特異性，可用于各類體外檢測、野毒株病毒篩選分離以及抗病毒藥物篩選等多個方面，具有極高的應(yīng)用及科研價值。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗羅非魚湖病毒的單克隆抗體及其細(xì)胞株和應(yīng)用。
背景技術(shù)
羅非魚是世界上最重要的淡水養(yǎng)殖魚類之一，是僅次于鯉科魚的第二大養(yǎng)殖魚類，每年全球產(chǎn)量約為450萬噸，產(chǎn)值超75億美元。羅非魚在世界范圍內(nèi)超100個國家中均有養(yǎng)殖，為全球人民提供重要的動物蛋白食物。中國是世界上最大的羅非魚生產(chǎn)國、消費國和出口國之一，羅非魚產(chǎn)量約占世界總量的37％，羅非魚養(yǎng)殖已成為我國漁民增收和出口創(chuàng)匯的重要產(chǎn)業(yè)之一。
羅非魚湖病毒病(Tilapia lake virus disease，TiLVD)是由羅非魚湖病毒(Tilapia lake virus，TiLV)感染所引起的傳染性疾病。TiLV是一種包膜病毒，由10個單股負(fù)鏈RNA片段組成，具有10個基因組節(jié)段(segment 1-10，S1-S10)。羅非魚湖病毒的暴發(fā)往往會給全球羅非魚養(yǎng)殖帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失，從而具有極大的威脅性。
相關(guān)技術(shù)中，對于羅非魚湖病毒的檢測，主要以基于PCR擴(kuò)增技術(shù)的各種分子生物學(xué)檢測方法為主，但這些分子生物學(xué)方法都是檢測病毒的核酸存在與否，方法單一，而且容易導(dǎo)致假陽性和假陰性結(jié)果，難以對該病做到定量檢測與確診。而且，基于PCR擴(kuò)增技術(shù)的各種分子生物學(xué)檢測方法通常需要將魚致死獲取組織。因此，急需其它方法來彌補(bǔ)分子生物學(xué)檢測方法的不足，如ELISA、免疫膠體金檢測方法，但如何獲得可以用于ELISA或免疫膠體金檢測方法的高特異性抗體對于本領(lǐng)域而言仍是一個挑戰(zhàn)。
因此，制備一種高特異性的抗羅非魚湖病毒的單克隆抗體及其穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株對于防控和診斷羅非魚湖病毒的傳播具有重大的意義。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在至少解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明提出一種抗羅非魚湖病毒的單克隆抗體及其細(xì)胞株，本發(fā)明中的細(xì)胞株能夠穩(wěn)定分泌抗羅非魚湖病毒的單克隆抗體，該單克隆抗體能夠特異性識別羅非魚湖病毒S10節(jié)段編碼蛋白，從而能夠有效鑒別羅非魚湖病毒，具有極高的應(yīng)用價值。
本發(fā)明的第一個方面，提供一種雜交瘤細(xì)胞株，該雜交瘤細(xì)胞株為雜交瘤細(xì)胞TiLV S10E3，于2020年11月5日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：C2020209。
本發(fā)明中的雜交瘤細(xì)胞TiLV S10 E3能夠穩(wěn)定分泌高滴度的抗羅非魚湖病毒單克隆抗體，從而能夠有效用于規(guī)模化制備抗羅非魚湖病毒單克隆抗體。
在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方式中，本發(fā)明中的雜交瘤細(xì)胞TiLV S10 E3通過如下步驟制備得到：
(1)S10重組表達(dá)蛋白的純化：
以羅非魚湖病毒TiLV-2017A株為模板，使用引物F/R進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
引物F/R的核苷酸序列為：
F：5’-TATCTGTCAAGCGACAGTGACTC-3’(SEQ ID NO:1)；
R：5’-CTAAGACTGCACGTCAAGAGAC-3’(SEQ ID NO:2)。
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