[發明專利]一種酪氨酸磷酸化多肽的捕獲方法

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• 申請號: 202110751640.6
• 申請日: 2021-07-02
• 公開（公告）號: CN113484122A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 賈偉;鄭乃中;劉怡;肖云;李志鳳;胡祎瑤;喻勇興
• 申請（專利權）人: 嘉華藥銳生物科技（昆山）有限公司
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N1/40;G01N27/62;C07K1/14
• 代理公司: 北京高文律師事務所 11359
• 代理人: 徐江華

1.一種酪氨酸磷酸化多肽的捕獲方法，其特征在于：將SH2結構域變體與磁性顆粒材料偶聯，此磁性材料可通過SH2結構域變體捕獲酪氨酸磷酸化肽段，并可通過磁力作用將捕獲組分與非目標組分的分離，捕獲組分可用于后續質譜分析，鑒定酪氨酸磷酸化肽段。

具體為：將SH2結構域變體的N-端或氨基酸殘基的氨基與具有能與氨基共價結合的活化磁性材料，通過反應共價鏈接，新的材料置于生物體蛋白的裂解多肽混合物中，新材料可通過可通過SH2結構域變體捕獲酪氨酸磷酸化肽段，完成捕獲后，可通過磁力作用將磁性顆粒及其捕獲的酪氨酸磷酸化肽段與非酪氨酸磷酸化肽段分離，之后，捕獲到的酪氨酸磷酸化肽段可以通過酸洗，從磁性材料上洗脫，洗脫組分可以通過質譜分析進行鑒定定性及質譜法定量。

2.根據權要求1所述的一種酪氨酸磷酸化多肽的捕獲方法，其特征在于：可捕獲復雜體系中的酪氨酸磷酸化肽段于磁性顆粒表面，實現酪氨酸磷酸化肽段與非酪氨酸磷酸化肽段物理空間的分布差異。

3.根據權要求1所述的一種酪氨酸磷酸化多肽的捕獲方法，其特征在于：磁性顆粒通過SH2結構域變體的N-端或氨基酸殘基的氨基與磁性顆粒的活化基團共價鏈接。

4.根據權要求1所述的一種酪氨酸磷酸化多肽的捕獲方法，其特征在于：完成捕獲后，可通過磁力作用將磁性顆粒及其捕獲的酪氨酸磷酸化肽段與非酪氨酸磷酸化肽段分離。

5.根據權要求1所述的一種酪氨酸磷酸化多肽的捕獲方法，其特征在于：捕獲到的酪氨酸磷酸化肽段可以通過酸洗，從磁性材料上洗脫。洗脫組分可以通過質譜分析進行鑒定定性及質譜法定量。

6.根據權要求1所述的一種酪氨酸磷酸化多肽的捕獲方法，其特征在于：SH2結構域變體氨基酸序列為：通過質譜采集得到的酪氨酸磷酸化肽段的二級質譜碎片進行對捕獲到的酪氨酸磷酸化肽段進行氨基酸序列的定性鑒定，并要求質譜碎片信息支持磷酸化共價修飾在酪氨酸殘基側鏈上。