[發(fā)明專利]一種人卵母細胞體外成熟液及其制備方法和應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110751405.9
• 申請日: 2021-07-02
• 公開（公告）號: CN113564104A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發(fā)明（設計）人: 林小貞;陳文彬
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳韋拓生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 深圳市德錦知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44352
• 代理人: 蘇登

1.一種人卵母細胞體外成熟液，其特征在于，配方包括：以無機鹽溶液為基礎液，添加褪黑素5-15μM/L和亞硒酸鹽3-10mg/L；所述無機鹽溶液包括無機鹽、能量物質(zhì)，氨基酸，維生素，激素和生長因子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人卵母細胞體外成熟液，其特征在于，所述無機鹽包括氯化鈉90.5～110.5mM/L、氯化鉀3.52～5.90mM/L、二水氯化鈣0.89～2.10mM/L、磷酸二氫鉀0.05～1.5mM/L、七水硫酸鎂0.18～2.20mM/L、碳酸氫鈉20～28mM/L、抑菌成份硫酸慶大霉素0.01～0.05g/L和人血白蛋白5～10g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人卵母細胞體外成熟液，其特征在于，所述能量物質(zhì)包括丙酮酸鈉0.05～0.10mM/L、L-乳酸鈉2.50～22.00mM/L和葡萄糖0.50～5.55mM/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人卵母細胞體外成熟液，其特征在于，所述氨基酸包括必需氨基酸1～2％(v/v)和非必需氨基酸0.45～1％(v/v)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人卵母細胞體外成熟液，其特征在于，所述維生素含量0.45～1％(v/v)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人卵母細胞體外成熟液，其特征在于，所述激素和生長因子包括重組胰島素樣生長因子(rIGF-1)0.01～1mg/mL，重組表皮細胞生長因子(rEGF)0.01～1mg/mL，重組促卵泡激素(rFSH)0.05～10IU/mL以及重組人絨毛膜促性腺激素(rhCG)0.05～10IU/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人卵母細胞體外成熟液，其特征在于，還包括酚紅0.01g/L。

8.一種制備如權(quán)利要求1-7任意一項所述的人卵母細胞體外成熟液的方法，其特征在于，包括以下步驟：

a、按配方稱量所有固體成分并分開放置；

b、按先固體后液體，將除激素，生長因子和人血清白蛋白外的所有成分加入并溶解于超純水中；

c、向步驟b獲得的溶液加入激素，生長因子和人血清白蛋白并溶解得基礎液；

d、測量并調(diào)節(jié)上述基礎液pH值為7.3±0.1，滲透壓為260～290mOsm/kg；

f、將基礎液經(jīng)0.22μm過濾器過濾并分裝、封口，得到人卵母細胞體外成熟液，并在2-8℃內(nèi)保存。

9.一種由權(quán)利要求8所述的方法配制而成的人卵母細胞體外成熟液。

10.一種如權(quán)利要求8所述的方法配制而成的人卵母細胞體外成熟液在人卵母細胞體外成熟培養(yǎng)過程中的應用。