[發明專利]基因組編輯系統和方法

在審

• 申請號: 202110750327.0
• 申請日: 2017-12-27
• 公開（公告）號: CN113652445A
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 李偉;周琪;滕飛
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/85;C12N15/90;A61K48/00;A61K38/46;A61P35/00;A61P29/00;A61P25/16;A61P9/00;A61P25/28;A61P25/30;A61P25/18;A61P25/00;A61P27/02
• 代理公司: 北京永新同創知識產權代理有限公司 11376
• 代理人: 欒星明;王子楠

1.一種用于對細胞基因組中的靶序列進行定點修飾的基因組編輯系統，其包含以下i)至v)中至少一項：

i)C2c1蛋白或其變體，和向導RNA；

ii)包含編碼C2c1蛋白或其變體的核苷酸序列的表達構建體，和向導RNA；

iii)C2c1蛋白或其變體，和包含編碼向導RNA的核苷酸序列的表達構建體；

iv)包含編碼C2c1蛋白或其變體的核苷酸序列的表達構建體，和包含編碼向導RNA的核苷酸序列的表達構建體；

v)包含編碼C2c1蛋白或其變體的核苷酸序列和編碼向導RNA的核苷酸序列的表達構建體；

其中所述向導RNA能夠與所述C2c1蛋白或其變體形成復合物，將所述C2c1蛋白或其變體靶向所述細胞基因組中的靶序列，導致所述靶序列中的一或多個核苷酸的取代、缺失和/或添加，

其中所述C2c1蛋白是來自Alicyclobacillus acidiphilus的AaC2c1蛋白或者來自Alicyclobacillus kakegawensis的AkC2c1蛋白，其中所述AaC2c1蛋白由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列組成，或者所述AaC2c1蛋白的變體包含與SEQ NO:1具有至少80％序列相同性的氨基酸序列并且具有野生型AaC2c1蛋白的RNA介導的DNA結合活性和/或DNA切割活性，并且其中所述AkC2c1蛋白由SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列組成，或者所述AkC2c1蛋白的變體包含與SEQ NO:5具有至少80％序列相同性的氨基酸序列并且具有野生型AkC2c1蛋白的RNA介導的DNA結合活性和/或DNA切割活性。

2.權利要求1的系統，其中所述AaC2c1蛋白的變體相對于SEQ ID NO:1所示的野生型AaC2c1蛋白包含氨基酸取代R785A并且具有野生型AaC2c1蛋白的RNA介導的DNA結合活性和/或DNA切割活性。

3.權利要求1或2的系統，其中所述AaC2c1蛋白的變體是核酸酶死亡的AaC2c1和脫氨酶的融合蛋白，所述脫氨酶是能夠接受單鏈DNA作為底物的胞嘧啶脫氨酶或能夠接受單鏈DNA作為底物的腺嘌呤脫氨酶。

4.權利要求3的系統，其中所述核酸酶死亡的AaC2c1在相對于SEQ ID NO:1所示的野生型AaC2c1蛋白的第785位的氨基酸被取代。

5.權利要求4的系統，其中所述核酸酶死亡的AaC2c1相對于SEQ ID NO:1所示的野生型AaC2c1蛋白包含氨基酸取代R785A。

6.權利要求1的系統，其中所述向導RNA是sgRNA。