[發明專利]用于快速培養腫瘤類器官的培養基、方法以及試劑盒

有效

• 申請號: 202110744566.5
• 申請日: 2021-07-01
• 公開（公告）號: CN113481162B
• 公開（公告）日: 2023-02-24
• 發明（設計）人: 富國祥;李遠闖;林漢卿;程春燕;李俊強
• 申請（專利權）人: 丹望醫療科技（上海）有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 趙麗婷

1.一種用于培養腸癌類器官的培養基，其特征在于，所述培養基由培養基組分和添加劑組分組成，其中，

所述培養基組分中由Advanced DMEM/F12和無菌蛋清提取液組成；

所述添加劑組分由以下組成：HEPES，1-10 mM；GlutaMAX，1-5 mM；B27，1%-2%（v/v）；N2，1%-2%（v/v）；N-acetylcysteine，0.1-1 mM；R-spondin-1，100-500 ng/ml；Noggin，10-100ng/ml； EGF，10-200 ng/ml；Nicotinamide，1-10 mM；gastrin I，5-10 nM；A83-01，200-500nM；ProstaglandinE2，1-20 nM；SB202190，5-10 μM；bFGF，10-500 ng/ml； FGF4，10-500ng/ml；FGF10，10-500 ng/ml；Y-27632 dihydrochloride，5-10 μM；

所述無菌蛋清提取液制備方法：取1-3天的新鮮雞蛋，分離蛋清分別過100 μm、70μm、40μm細胞濾網，收集液再經負壓吸引過0.22 μm濾器制得無菌蛋清提取液；

所述添加劑組分占所述培養基總體積的3%-5%。

2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述無菌蛋清提取液的濃度為20-30%（v/v）。

3.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，所述bFGF的濃度為10-100 ng/ml；所述FGF4的濃度為10-100 ng/ml；所述FGF10的濃度為10-100 ng/ml。

4.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于，

所述添加劑組分進一步包括青霉素、鏈霉素和兩性霉素B混合液；

任選地，所述青霉素、鏈霉素和兩性霉素B混合液中所述青霉素濃度為100-200 U/mL；所述鏈霉素濃度為100 - 200 μg/ml；所述兩性霉素B的濃度為250– 500 ng/mL。

5.權利要求1-4中任一項所述的培養基在培養腸癌類器官中的用途。

6.一種培養腸癌類器官的方法，其特征在于，所述方法包括：

1）將腸癌樣本進行消化處理，以便獲取腸癌細胞團；

2）利用權利要求1-4中任一項所述的培養基培養所述腸癌細胞團，以便獲取腸癌類器官。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述消化處理包括利用組織消化液對所述腸癌樣本進行消化，以便獲取含有腸癌細胞團的細胞懸液，

其中，所述組織消化液包括透明質酸酶以及Dispace type II；

任選地，所述組織消化液進一步包括膠原蛋白酶IV；

任選地，所述透明質酸酶的濃度為10-100 μg/mL；

任選地，所述Dispace type II的濃度為50 - 200 μg/mL；

任選地，所述膠原蛋白酶IV的濃度為100-1000 U/mL。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述組織消化液進一步包括培養基Advanced DMEM/F12、Y-27632 dihydrochloride以及任選的青霉素、鏈霉素和兩性霉素B混合液；所述Y-27632 dihydrochloride的濃度為1-20 μM；所述青霉素、鏈霉素和兩性霉素B混合液中所述青霉素濃度為100-200 U/mL；所述鏈霉素濃度為100 - 200 μg/ml；所述兩性霉素B的濃度為250–500 ng/mL。