[發明專利]一種強直性脊柱炎易感基因的檢測引物和探針及檢測方法

在審

• 申請號: 202110742729.6
• 申請日: 2021-06-30
• 公開（公告）號: CN113388678A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發明（設計）人: 高瑛瑛;盛楠;張波;王雯雯
• 申請（專利權）人: 南通市第一人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京高航知識產權代理有限公司 11530
• 代理人: 喬浩剛

1.一種強直性脊柱炎易感基因的檢測引物和探針，其特征在于，所述引物序列為：

rs1799724-F：5’-GGGCTATGGAAGTCGAGTATGG-3’；

rs1799724-R：5’-TGGAGGTCCTGGAGGCTCTT-3’；

所述探針序列為：

rs1799724-wC：5’-VIC-CCCCCCTTAACGAA-MGB-NFQ-3’；

rs1799724-mT：5’-FAM-CCCCCTTAATGAAG-MGB-NFQ-3’。

2.根據權利要求1所述的強直性脊柱炎易感基因的檢測引物和探針，其特征在于，所述引物和探針均以TNF基因的rs1799724位點為靶基因。

3.根據權利要求1所述的強直性脊柱炎易感基因的檢測引物和探針，其特征在于，所述探針rs1799724-wC特異性檢測等位基因C，等位基因C檢測位點核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

4.根據權利要求1所述的強直性脊柱炎易感基因的檢測引物和探針，其特征在于，所述探針rs1799724-mT特異性檢測等位基因T，所述等位基因T檢測位點核苷酸序列如SEQ IDNo.6所示。

5.一種非疾病診斷目的強直性脊柱炎易感基因的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、采集樣品并提取基因組DNA；

S2、配制擴增與檢測反應體系；

S3、上熒光定量PCR儀，利用引物rs1799724-F和rs1799724-R進行目的基因的PCR擴增，利用探針rs1799724-wC和rs1799724-mT檢測等位基因特異性熒光信號；

S4、對SNP檢測結果進行分析。

6.根據權利要求5所述的非疾病診斷目的強直性脊柱炎易感基因的檢測方法，其特征在于，步驟S2所述反應體系包括：10μL 2×Premix Ex Taq，1μL 10μmol/L rs1799724-F，1μL 10μmol/L rs1799724-R，1μL 10μmol/L rs1799724-wC，1μL 10μmol/L rs1799724-mT，0.4μL 50×Rox Reference Dye或0.2μL 50×Rox Reference Dye II，1-150ng基因組DNA，ddH₂O補齊至20μL。

7.根據權利要求5所述的非疾病診斷目的強直性脊柱炎易感基因的檢測方法，其特征在于，步驟S3所述熒光定量PCR擴增條件為：95℃預變性10min；依次按以下條件循環40次：95℃15s，55℃20s，60℃1min，采集熒光信號。

8.一種用于檢測強直性脊柱炎易感基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含如權利要求1所述的引物和探針。

9.根據權利要求8所述的用于檢測強直性脊柱炎易感基因的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含緩沖液、DNA聚合酶、對照品。

10.根據權利要求9所述的用于檢測強直性脊柱炎易感基因的試劑盒，其特征在于：所述對照品包括陰性對照品和陽性對照品。