[發明專利]一種改造的巨噬細胞及其應用

有效

• 申請號: 202110741447.4
• 申請日: 2021-07-01
• 公開（公告）號: CN113439711B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發明（設計）人: 徐小燕;夏蒲;郭鳳;林煒煒;張皓婉;吳潔;金戈;馮喬慧
• 申請（專利權）人: 中國醫科大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027;C12N15/52;C12N5/10
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標代理有限公司 21107
• 代理人: 馬維駿

1.一種巨噬細胞Adar基因敲除小鼠模型的構建方法，其特征在于，所述方法基于基因敲除技術對C57BL/6N小鼠的Adar基因進行敲除，然后與Lyz2-Cre工具鼠交配，最終構建出兩種不同基因型的小鼠模型；所述的小鼠模型包括Flox/Flox,Lyz2-Cre基因敲除型和Flox/Flox基因敲除型；所述方法中敲除基因為Adar基因第4-6外顯子作為條件敲除區，其核苷酸序列如SEQ NO ID:1所示；所述方法的具體步驟包括：

步驟1、為了工程化靶向載體，使用BAC克隆RP23-146K23作為模板通過PCR產生同源臂和條件敲除區，采用PCR引物序列為：

F1：5’-TCCTTATATCAGCGAAACAGCCA-3’，R1：5’-AGCAAGCTCTCCCAGACAGTC-3’；

步驟2、在靶向載體中，Neo盒的兩側為自動刪除錨定位點，DTA將用于陰性篩選；

步驟3、將靶向載體電轉入C57BL/6N小鼠的胚胎干細胞中，與Cre基因重組后獲得Adar基因敲除的Flox/Flox小鼠；

步驟4、將Flox/Flox小鼠與Lyz2-Cre工具鼠交配后，獲得重組雜合仔鼠；

步驟5、將重組雜合仔鼠與Flox/Flox仔鼠進行回交，獲得Adar基因敲除的Flox/Flox,Lyz2-Cre小鼠。

2.一種根據權利要求1所述的巨噬細胞Adar基因敲除小鼠模型的應用，其特征在于，所述應用包括在肝臟疾病發病機制的研究以及肝臟疾病藥物篩選方面的應用。

3.一種根據權利要求1所述的巨噬細胞Adar基因敲除小鼠模型的應用，其特征在于，所述應用包括在腫瘤細胞應用化療藥物發生耐藥的機制以及緩解化療藥物耐藥方面的研究。

4.一種根據權利要求1所述的巨噬細胞Adar基因敲除小鼠模型得到改造的巨噬細胞，其特征在于，所述細胞為Adar基因敲除的巨噬細胞。

5.一種根據權利要求4的巨噬細胞，其特征在于，所述細胞在抑制腫瘤大血管生成和抑制腫瘤生長方面的研究中應用。