[發(fā)明專利]一種草地貪夜蛾SoxC基因、其編碼蛋白、載體、菌株及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110731511.0
• 申請(qǐng)日: 2021-06-29
• 公開（公告）號(hào): CN113603758B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅光華;方繼朝;張茹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C07K14/435
• 分類號(hào): C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/18;C12N15/89;A01K67/033;A01N37/46;A01N47/44;A01P7/04;C12R1/19
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 孫斌

本發(fā)明公開了一種草地貪夜蛾SoxC基因、其編碼蛋白、載體、菌株及應(yīng)用。本發(fā)明草地貪夜蛾SoxC基因，其堿基序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發(fā)明首次在草地貪夜蛾中克隆出SoxC基因，并獲得了草地貪夜蛾SoxC基因的DNA全長(zhǎng)序列，SoxC基因的蛋白序列，并且將原核表達(dá)純化的草地貪夜蛾SoxC基因蛋白制備了多克隆抗體，可特異性地從草地貪夜蛾體內(nèi)檢測(cè)出SoxC基因的蛋白。本發(fā)明純化出的草地貪夜蛾SoxC基因多可隆抗體可用于草地貪夜蛾不同發(fā)育時(shí)期其體內(nèi)SoxC基因蛋白表達(dá)含量的檢測(cè)，明確該基因的表達(dá)動(dòng)態(tài)，預(yù)測(cè)該基因的重要生物學(xué)功能；同時(shí)本發(fā)明的SoxC基因在控制草地貪夜蛾羽化中起到重要作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種草地貪夜蛾SoxC基因、其編碼蛋白、載體、菌株及應(yīng)用。

背景技術(shù)

草地貪夜蛾Spodoptera?frugiperda屬鱗翅目夜蛾科，別名秋粘蟲。雜食性，是玉米、高粱、小麥、大麥、牧草等多種農(nóng)作物上的重要害蟲。原產(chǎn)于南美洲與北美洲的南部與中部，目前該害蟲已經(jīng)在逐漸傳播至中國多個(gè)省區(qū)市。草地貪夜蛾對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有重大威脅。已經(jīng)報(bào)道該害蟲對(duì)多種藥劑已經(jīng)有較高的抗藥性，目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的草地貪夜蛾防控面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)，急待開拓減少化學(xué)農(nóng)藥使用的新型無公害防控手段。

昆蟲SoxC基因是一個(gè)重要調(diào)控基因，它是蛻皮激素信號(hào)早期響應(yīng)基因，參與蛻皮激素信號(hào)的下游傳導(dǎo)。以昆蟲變態(tài)發(fā)育調(diào)控關(guān)鍵基因?yàn)榘袠?biāo)防治昆蟲是一種害蟲防控新興方法。目前草地貪夜蛾中SoxC基因尚未有研究報(bào)道，基因的作用也不清楚，從體外獲得的重組SoxC基因也無研究。因此克隆草地貪夜蛾SoxC基因基因序列并且獲得體外重組蛋白并制備多克隆抗體，對(duì)深入研究該基因的功能并進(jìn)一步開發(fā)其抑制劑有著重要的理論意義和實(shí)踐作用。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種草地貪夜蛾SoxC基因(Sf-SoxC)的DNA序列，該基因在昆蟲羽化過程中起到重要作用，通過將草地貪夜蛾SoxC基因敲除，草地貪夜蛾羽化異常并最終死亡，達(dá)到防治草地貪夜蛾的作用。

本發(fā)明還提供了一種Sf-SoxC蛋白、含編碼Sf-SoxC的DNA序列的重組表達(dá)載體和轉(zhuǎn)基因重組菌株以及應(yīng)用。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所述一種草地貪夜蛾SoxC基因的DNA序列，其DNA序列如SEQ?ID?NO.1所示。

本發(fā)明所述草地貪夜蛾SoxC基因其編碼的蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

本發(fā)明所述含有用于編碼草地貪夜蛾SoxC基因的DNA序列的重組表達(dá)載體。

其中，將所述DNA序列插入到大腸桿菌表達(dá)載體中得到的表達(dá)草地貪夜蛾SoxC基因的重組表達(dá)載體。

作為優(yōu)選，所述大腸桿菌表達(dá)載體為pET32a。

本發(fā)明所述的含草地貪夜蛾SoxC基因的DNA序列的轉(zhuǎn)基因重組菌株。

其中，所述重組菌株是將重組表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌中，篩選得到轉(zhuǎn)基因重組菌株。

作為優(yōu)選，所述的大腸桿菌為BL21(DE3)。

本發(fā)明所述的草地貪夜蛾SoxC基因的DNA序列在生產(chǎn)草地貪夜蛾SoxC基因原核表達(dá)蛋白中的應(yīng)用。

其中，所述草地貪夜蛾SoxC基因原核表達(dá)蛋白的制備，包括以下步驟：

(1)草地貪夜蛾SoxC基因基因的擴(kuò)增；

(2)草地貪夜蛾SoxC基因基因原核表達(dá)載體構(gòu)建；

(3)草地貪夜蛾SoxC基因原核表達(dá)蛋白的變性和復(fù)性；

(4)草地貪夜蛾SoxC基因原核表達(dá)蛋白的純化即得到草地貪夜蛾SoxC基因原核表達(dá)蛋白。