[發(fā)明專利]一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110725839.1 | 申請日： | 2021-06-29 |
| 公開（公告）號： | CN113388568A | 公開（公告）日： | 2021-09-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 許建鋒;高成昱;馬輝;張海霞;于新樂;李英麗;張江紅;張玉星 | 申請（專利權(quán)）人： | 河北農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N5/04 | 分類號： | C12N5/04 |
| 代理公司： | 北京慕達星云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 崔自京 |
| 地址： | 071001 河北*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 原生 質(zhì)體 提取 方法 | ||
1.一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將梨葉片置于酶解液中酶解，得到酶解產(chǎn)物，所述酶解液包括如下質(zhì)量濃度的組分：纖維素酶0.5％～2.0％w/v、離析酶0.2％～0.5w/v、果膠酶0.1～0.5％w/v、甘露醇0.3～0.7mol/L、2-(N-嗎啉基)乙磺酸20mM、氯化鉀20mM、氯化鈣10mM和0.05～0.1％牛血清蛋白；
(2)向所述酶解產(chǎn)物中加入等體積的W5清洗液，過篩取濾液，所述W5清洗液包括如下質(zhì)量濃度的組分：2-(N-嗎啉基)乙磺酸2mM、氯化鉀5mM、氯化鈣125mM、氯化鈉154mM和葡萄糖5mM；
(3)將所述濾液離心后得沉淀，洗滌后得梨葉原生質(zhì)體。
2.如權(quán)利要求1所述的一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法，其特征在于，步驟(1)中所述梨葉片為苗齡為30～50d的梨組培苗葉片。
3.如權(quán)利要求1所述的一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法，其特征在于，步驟(1)中所述梨葉片和酶解液的質(zhì)量體積比為1:10。
4.如權(quán)利要求1所述的一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法，其特征在于，所述步驟(1)中的酶解條件為25～28℃、黑暗條件下、靜置酶解11～12h。
5.如權(quán)利要求1所述的一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法，其特征在于，酶解前將所述梨葉片處理成0.5～1mm寬的絲。
6.如權(quán)利要求1所述的一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法，其特征在于，步驟(2)中所述過篩為過300目篩。
7.如權(quán)利要求1所述的一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法，其特征在于，步驟(3)中所述離心為100～150r/min條件下離心4min。
8.如權(quán)利要求1所述的一種梨葉原生質(zhì)體的提取方法，其特征在于，步驟(3)中洗滌采用W5清洗液。
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