[發明專利]特異識別副溶血性弧菌的納米抗體、重組載體、宿主細胞及其應用

有效

• 申請號: 202110721410.5
• 申請日: 2021-06-28
• 公開（公告）號: CN113461814B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 王妍入;王鵬;廖星蕊;張瑤;魏娟;王建龍;馬敏
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;G01N33/535;G01N33/543
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 祝蓉蓉

本發明提供了一種特異識別副溶血性弧菌的納米抗體，包括該納米抗體的編碼基因、同時還提供了含有編碼該納米抗體核苷酸序列的載體和宿主細胞，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，該納米抗體對副溶血性弧菌有好的特異性和結合能力。本發明提供的特異識別副溶血性弧菌的納米抗體，特異性好、穩定性強、表達產量高，對其他非副溶血性弧菌均不結合，可以特異識別副溶血性弧菌。

技術領域

本發明屬于微生物檢測領域。具體而言，本發明涉及特異識別副溶血性弧菌的納米抗體、重組載體、宿主細胞及其應用。

背景技術

副溶血性弧菌是一種食源性病原體，在臨床上可引起腹痛、嘔吐、腹瀉。進食含有該菌的食物可致食物中毒，也稱嗜鹽菌食物中毒。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性桿菌，呈弧狀、桿狀、絲狀等多種形狀，無牙孢。其也是一種海洋細菌，主要來源于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產品。隨著海產品市場需求的逐漸加大，為保證從鮮食到餐桌各個食品加工環節的安全性，以及其對海產品的低感染劑量，一種快速靈敏的檢測方法對于確保我們食品供應的安全至關重要。

目前針對副溶血性弧菌所研究的檢測方法較多，傳統方法包括平板培養法、細胞計數法、生物發光法、阻抗測定法、免疫學方法。目前應用最廣泛的是平板計數法和以抗原-抗體反應為基礎的免疫學方法。基于微生物的生長原理，傳統的食品病原體檢測方法必須在微生物實驗室中進行，并且通常需要復雜的樣品處理，過程較為繁瑣，一般需要4-7天才能得到結果。免疫學方法是指以抗原抗體特異性結合反應為基礎的檢測方法。為了檢測特異性的微生物及其毒素，抗體被廣泛應用于各種免疫學檢測方法研究。該方法中，大部分抗體都來源于鼠或兔血清，其主要評價指標包括特異性和靈敏性，種類包括多克隆抗體和單克隆抗體。雖然多克隆抗體制備過程操作較簡單，制備周期也較短，成本較低。但是，應用多克隆抗血清也有其自身弊端，由于動物免疫反應具有可變性和偶然性，多克隆抗體在特異性方面較差。而單克隆抗體則需要較大的成本和時間，不同批次的抗體的效價也會有所差異，此外，這些抗體的生產并不符合當前動物福利的趨勢，這促使人們越來越關注基因工程抗體。

噬菌體展示納米抗體技術是將外源的基因片段插入到噬菌體的基因片段中，在噬菌體的衣殼蛋白外殼進行融合表達，此方法簡單、快速，可以大批量生產。而納米抗體作為一種缺乏重鏈只含有輕鏈的抗體，分子量只有常規抗體的十分之一，是目前已知的和抗原結合的最小單位，納米抗體較長的CDR3區使得它可以識別抗原的隱蔽區域。本公司已申請發明專利：CN112707963A-廣譜識別沙門氏菌的納米抗體、重組載體、宿主細胞及其應用，提供的抗沙門氏菌納米抗體，廣譜性好、穩定性強、表達產量高。

目前現有納米抗體中，尚未有針對副溶血性弧菌的納米抗體，且應用該納米抗體對副溶血性弧菌的檢測技術被提出。

發明內容

針對以上現有技術的不足，本發明提供了一種對副溶血性弧菌有良好特異性、識別能力和結合能力的納米抗體，以及利用該納米抗體作為捕獲抗體和檢測抗體，應用在副溶血性弧菌的檢測技術中，具體通過以下技術實現。

特異識別副溶血性弧菌的納米抗體，所述納米抗體的氨基酸序列包括氨基酸序列框架區FR1、FR2、FR3、FR4，以及氨基酸序列互補決定區CDR1、CDR2、CDR3；

氨基酸序列框架區FR1(納米抗體的第一段恒定區序列)的氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示；氨基酸序列框架區FR2(納米抗體的第二段恒定區序列)的氨基酸序列如SEQ IDNO:4所示；氨基酸序列框架區FR3(納米抗體的第三段恒定區序列)的氨基酸序列如SEQ IDNO:5所示；氨基酸序列框架區FR4(納米抗體的第四段恒定區序列)的氨基酸序列如SEQ IDNO:6所示；

氨基酸序列互補決定區CDR1(納米抗體的第一段可變區序列)的氨基酸序列如SEQID NO:7所示；氨基酸序列互補決定區CDR2(納米抗體的第二段可變區序列)的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示；氨基酸序列互補決定區CDR3(納米抗體的第三段可變區序列)的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。